مقدمه:

1. آلودگی آب

تغییر مواد محلول و یا معلق و یا تغییر درجه حرارت و دیگر خواص فیزیکی ، شیمیایی ، بیولوژیکی آب درحدی که آن را برای مصارفی که برای آن مقرر شده است مضر یا غیر مفید سازد آلودگی آب گفته می شود. برهمین اساس , آلودگی آب در زیر گروه های ذیل طبقه بندی می گردد :

·          آلودگی بیولوژیکی

·          آلودگی شیمیایی

·          آلودگی حرارتی

·         آلودگی فیزیکی 

آلودگی بیولوژیکی:

به دلیل تخلیه مواد آلی و بالا رفتن میزان BOD در فاضلاب اکسیژن منابع آبی مصرف شده و میکروارگانسیم های بی هوازی در چنین محیطی رشد می نمایند بنابراین پس از مدتی بوی نامطبوع سولفید هیدروژن، متان و آمونیاک از آن به مشام رسیده و رنگ آب به مرور تیره می گردد .شاخص اندازه گیری آلودگی بیولوژیکی گروهی از باکتریهای کالیفرمی که اصطلاحاً Ecoli نامیده می شوند میباشد 

آلودگی شیمیایی :

 بالا رفتن میزران COD به دلیل مصرف بعضی از مواد شیمیایی باعث مصرف اکسیژن محلول در آب و از بین رفتن شرایط متعارف زیستی آبزیان میگردد . همچنین تغییرات PH موجب برهم خوردن تعادل اکولوژیک محیط آبی شده و فعل و انفعلات شیمیایی را تسریع مینماید .

افزوده شدن فلزات سنگینی مانند کروم ، نیکل ، سرب و همچنین محصولات فرعی صنایع پلاستیک سازی مانند PCB-Pvc و ضایعات رادیواکتیو و... در دور تسلسل زنجیره غذایی و در ارگانیزمهای بالای هرم غذایی تجمع یافته و اثرات این مواد به صورت بارز در موجودات راس هرم غذایی مانند انسان قابل مشاهد است. (تجمع بیولوژیک)

آلودگی حرارتی:

به میزان هر 10 درجه سانتیگراد افزایش دما ،متابولیسم آبزیان دو برابر میشود و بنابر این مصرف اکسیژن نیز افزایش مییابد . از طرف دیگر افزایش دمای اب باعث خروج گازهای محلول در آب از جمله اکسیژن میگردد.این دومسئله در کنارهم میتوانند باعث کاهش میزان اکسیژن محلول در آب وازبین رفتن شرایط زیستی برای آبزیان گردند.

آلودگی فیزیکی:

ازدیاد مواد معلق باعث افزایش کدورت منابع آبی ودر نتیجه کاهش عبور نور خورشید به اکوسیستم آبی ودر نهایت منتج به کاهش فعالیتهای هوازی در سطوح پایینی اب میگردد.از طرف دگر موادی ازقبیل مواد نفتی ،چربی،روغن ومواد رنگی علاوه بر افزایش COD  که موجب بالارفتن بار آلودگی ورشد میکروارگانیسمهای بیماریزا در محیطهای آبی میگردد با ایجاد لایه نازکی بر سطح آب علاوه بر ایجاد چشم انداز نامطلوب ،مانع انجام عملیات فتوسنتز یا همان اکسیژن گیری آبها می شود.

  2. محیط EMB AGAR (محيط ائوزين متيلن بلو)

اشيرشيا كولي در محيط EMB باتوليد كلني هايي با جلاي فلزي

يك محيط افتراقي در بردارنده لاكتوز با پپتون وائوزين متيلن بلو است . رنگهاي انيليني موجود در محيط ( ائوزين ، متيلن بلو ) مانع از رشد باكتريهاي گرم ـ مثبت مي شوند .

اين رنگها همچنين در PH اسيدي باهم تركيب شده وايجاد رسوب مي نمايند . بنابراين مي توان از وجود آنها بعنوان شاخصي جهت تخمير لاكتوز و توليد اسيد نيز استفاده نمود .

باكتريها گرم ـ منفي بر اساس تخمير يا عدم تخمير قند لاكتوز كلني هاي صورتي و يا بي رنگ تشكيل مي دهند .

باكتري اشرشيا كلي ( E.coli ) كه لاكتوز را بشدت تخمير نموده و مقدار زيادي اسيد توليد مي نمايد، بر روي اين محيط داراي جلاي فلزي سبزرنگ مي باشد .

كلبسيلا، انتروباكتر، سراشيا كه تخميركنندگان ضعيف لاكتوز هستند بر روي محيط كلني هاي ارغواني توليد مي نمايند .

پروتئوس، سالمونلا، شيگلا كه قادر به تخمير لاكتوز نيستند بر روي اين محيط كلني هاي شفاف ايجاد مي‌كنند .

  3. Brilliant-green Phenol-red Lactose Sucrose Agar (BPLS)

Escherichia coli on BPLS Agar. The colonies are yellow due to the low pH which is caused by the production of acid during fermentation of lactose and/or sucrose.

با توجه به PH  پایین که ناشی از تولید اسید طی فرآیند تخمیر لاکتوز و سوکروز می باشد کلنی های E.coli زرد رنگ می باشند.

Salmonella on BPLS Agar. The colonies are red because the bacterium does not ferment lactose or sucrose.

به دلیل عدم تخمیر لاکتوز و سوکروز کلنی های باکتری سالمونلا به رنگ قرمز مشاهده می شود.

 تئوری و شرح آزمایش :

برای جستجوی میکروب های آلوده کننده آب از تست شناسایی M.P.N استفاده می کنیم که به شرح زیر می باشد:

9 لوله آزمایش را به سه دسته سه تایی تقسیم می کنیم.

                                              گروه اول(2X)                   گروه دوم(X)                 گروه سوم(X)

مقدار آب                                 10 میلی لیتر                      1 میلی لیتر                    0.1 میلی لیتر

آبگوشت مغذی                               + + +                              + + +                             + + +

محلول لاکتوز 20 درصد                   + + +                              _ _ _                            _ _ _

محلول لاکتوز 10 درصد                   _ _ _                              + + +                            + + +

بعد از انجام آزمایش لوله ها را  به مدت 24 ساعت در  Incubator می گذاریم.

پس از این زمان درصورت آلوده بودن آب حباب هایی در لوله های dorham ایجاد می گردد که نشان از رشد میکروارگانیسم می باشد.این حباب ها ناشی از مصرف لاکتوز هستند که تولید گاز می کنند.

** لوله dorham : لوله های ریزی می باشند که به صورت واژگون در لوله های آزمایش قرار دارند.

عدم وجود حباب حاکی از ان است که آب ما عاری از میکروارگانیسم می باشد.

در صورت مثبت بودن رشد میکروارگانیسم باکتری موجود را در محیط EMB AGAR کشت می دهیم و آن را در دمای 35 درجه سانتی گراد و به مدت 48 ساعت در incubator می گذاریم.

در صورت وجود کلنی های سبز رنگ باکتری مورد نظر E.coli  و در صورت وجود کلنی های صورتی،لزج و نرم باکتری ما می تواند گستره ای از کلستریدیوم ها خصوصا گونه پرفریجنس،انتروکوک ها و استرپتوکوک های انتروکوکی باشند.

** روش استاندارد این آزمایش کشت باکتری در محیط birillinat green agar در دمای 44 درجه سانتی گراد و طیف زمانی 48 ساعت انجام می گیرد.

نتیجه آزمایش:

در هیچ یک از لوله های آزمایش ما حباب تشکیل نشد.به عبارت دیگر آب مورد آزمایش سالم بوده و هیچ میکروارگانیسمی در ان وجود نداشته است.پس نیازی به ادامه مراحل آزمایش که کشت باکتری در محیط کشت می باشد نیست.

منابع:

http://www.jlindquist.net

http://www.microbiologyatlas.kvl.dk

 starters.blogfa.com