جستجوی سالمونلا در فرآورده های گوشتی

مقدمه:

 

1) در مورد سالمونلا:

  سالمونلا باکتري گرم منفي است که در جوجه‌ها و تخم‌مرغها معمولاً وجود دارد. سالمونلا عامل يکي از شايعترين مسموميتهاي غذايي مي‌باشد. سالمونلا مي‌‌تواند تخمدانهاي پرنده را آلوده کند و قبل از تخم گذاردن پرنده، وارد تخم مرغ شود يا اينکه بهنگام تخم گذاردن پرنده به پيوسته تخم مرغ نفوذ کند. سالمونلا با پختن غذا از بين مي‌رود ولي غذاهايي که حاوي تخم مرغ خام هستند (مانند سس مايونز) مشکل‌ساز خواهند بود.

اين بيماري از طريق تماس با پوست برخي از دوزيستان مثل لاک‌پشت نيز قابل انتقال است.

سالمونلا در تخم مرغ :

سالمونلوسيس كه عامل آن اس.پولوروم ( s . Pullorum) است ، بيماري شناخته شده ماكيان است. اكنون سالهاست كه اين بيماري تقريباً در همه كشور ها تحت كنترل است و اين ميكروب بنظر مي رسد مسئله اي عليه عموم بوده باشد . اما عفونت هاي ساب كلينيكي ( sub- clinic ) ماكيان توسط گونه هاي ديگر سالمونلا همچنين وجود ناقلين بين آنها به خصوص مرغها ، يكي از عوامل اصلي سرايت ميكروب در مسموميت غذايي انسان در سطح جهان است . تخم مرغ بطور طبيعي طوري ساخته شده است كه حفاظ مؤثري ( پوسته ) در برابر ورود هر چه زيانبار از جمله ميكروبها داراست و بنابراين داخل تخم مرغ هنگام تولد ان بطور طبيعي استريل است و باكتري ها از قبيل سالمونلا در روده و حفره ابتداي روده ( cecum ) وجود دارند . قسمت پوسته هنگام تولد تخم آلوده شده و آلودگي ميكروبي در تمام مراحل تا آنگاه كه جوجه پوسته را مي شكند ، وجود دارد . جوجه با نوك زدن به پوسته تخم بدنيا مي آيد و سيستم تغذيه اي جوجه به اين وسيله از پوسته آلوده با سالمونلا آلوده ميشود . تغييرات تدريجي در تيپ هاي ( serotype ) سالمونلا در دسته ماكيان در هر زمان وجود دارد . اين طور كه سروتيپ موجود به آرامي از بين مي رود و از غذاي آلوده يا منابع ديگر ، ميكروب جديد جانشين آن ميشود . اين جانشيني ميكروبي عموماً به انسان رسيده باعث آلودگي غذايي و مسموميت مي گردد . بين سال هاي 1987 و 1990 آلودگي گسترده از سالمونلا اينتريتيديس ( Enteritidis ) در آمريكا و انگليس و جاهاي ديگر وجود داشت . پيدا شدن يك تخم مرغ كه از داخل توسط اين ميكروب آلوده بود ، زنگ خطر را بصدا درآورد و موجب نگراني توليدكنندگان تخم مرغ گرديد . بعد از آن هنوز اين اتفاق تكرار نشده است اما بدگماني عمومي بمدت زيادي وجود خواهد داشت .

 

سالمونلا

باسیل گرم منفی – بدون کپسول  - متحرک (فلاژله پری‌تریش) -  مقاوم برابر عوامل شیمیایی و فیزیکی (سروتیپ کلراسوئیس برای تعیین کفایت دستگاه استریل)

بی‌هوازی اختیاری -  کلونی  Sمحدب آبدار با سطح صاف خاکستری – در EMB کلونی‌های لاکتوز منفی بی‌رنگ – محیط انتخابی SS، BG و BS

کاتالاز مثبت - اکسیداز منفی – عدم تخمیر لاکتوز – تولید گاز (به جز تیفی)  - تست لیزین دکربوکسیلاز مثبت – متغیر در مصرف سیترات و تولید H2S

 

2) در مورد محیط های کشت مورد استفاده در این آزمایش:

 

الف) محيط سالمونلا ـ شيگلا (s.s) :

در محيط S.s تركيباتي مانند پپتون ، لاكتوز ، املاح صفراوي ، نوترال رد، آگار، بريلين گرين ، تيو سولفات سديم وجود دارد . اين محيط فقط اجازه رشد به باكتري هاي سالمونلا و شيگلا را مي دهد . بريلين گرين موجود در محيط مانع رشد باكتريهاي گرم ـ مثبت و ديگر گرم منفي ها در محيط S.s مي شود . با استفاده از اين محيط مي‌توان سوشهاي تخمير كننده لاكتوز را از سوشهايي كه توانايي تخمير لاكتوز را ندارند، تشخيص داد .

سالمونلا ، شيگلا قادر به تخمير لاكتوز نبوده، درمحيط S.s كلني هاي بي رنگ ايجاد مي كنند كه ارزش تشخيصي دارد .

 

طرز تهيه :

 

براي ساخت اين محيط مقدار مورد نياز پودر S.s را در آب مقطر ريخته و به حجم مي رسانيد آنگاه بوسيله جوشاندن پودر را در آب مقطر كاملاً حل مي‌كنيد . اين محيط احتياج به اتوكلاو ندارد .

 

ب) محیط کشت اسلنت تریپل شوگر آیرون آگار(Triple Sugar Iron agar slant (TSI slant:

 

:Control organisms
E.COLI: A/A(G)

Shigella felexneri: K/A

Proteus vugaris: K/A,H2S

 Pseudomonas aeruginosa: K/N

Ancubate: Aerobic 35° C, 24  hrs
shelf life: 8 week

Price(baht): (5 return tube)

 

محیط 3 قندی است که به صورت مارپیچ کشت می دهیم.بسته به زرد شدن سطح یا عمق یا کل لوله قند مصرفی را شناسایی کنیم.گلوگز+(بالای محیط) ،  فروکتوز+(پایین محیط) ، ساکارز+(کل محیط)

 

ج) :Simmon citrate

 

 

باکتری در اثر مصرف سیترات محیط سبز زنگ را به آبی رنگ تبدیل می کند.

 

تئوری آزمایش:

 

سالمونلا باکتری هایی میله ای،گرم منفی،دارای فلاژله ازز نوع مژک،اسپور تولید نمیکنند،گلوکز مصرف می کنند،مصرف کننده لاکتوز و ساکارز نیستند،منشا روده ای دارند و به عنوان باکتری های مدفوعی شناخته می شود.از تخم مرغ،گوشت های قرمز کشتار شده به روش های غیر بهداشتی جدا شده اند.

می توانند در انسان اگر به تعداد کافی وارد بدن شوند از طریق دما مسمومیت ایجاد کنند.قبلا با توجه به مسمومیتی که در موجود هدف بوجود می آوردند دسته بندی می شدند اما امروزه بر مبنای سه آنتی زن سطحی یا سوماتیک(o) ، آنتی ژن فلاژله ای(H) و آنتی ژن کپسولی(Vi) دسته بندی می شوند.هر دسته یه زیر گروه هایی تقسیم می شود که از لحاظ سرولوژیکی با همدیگر تفوت دارند که این گروه ها را سرووار یا سروتیپ می گویند و هکرام از سرووار ها نیز با هم تفات دارند که بیووار یا بیوتیپ گفته می شوند.

در ارتباط با مسمومیت شاخصی تحت عنوان پاتوژنیسه(شاخص بیماری زایی) معرفی می شود که عبارت است از نسبت تعداد افراد با علایم بیماری به تعداد کل افراد مجاور شده با عامل بیماری.

این قدرت بیماری زایی در به وجود امدن علایم بیماری نقش مهمی دارد.هر چه باکتری قدرت بیماری زایی بالاتری داشته باشد تعدادی که توانایی ایجاد بیماری در فرد را دارد کم است و هرچه قدرت بیماری زایی کمتر باشد بایستی تعداد بیشتری میکروارگانیسم وارد بدن شوند تا بتوانند ایجاد مسمومیت کنند.مسمومیت با ایجاد درد در ناحیه شکم به شکل تهوع،استفراغ و در مراحل شدید تر اسهال بروز می کند.طول دوره بیماری 2 تا 8 روز می باشد که می تواند طولانی تر هم باشد.

درمان بوسیله ی آنتی بیوتیکی به نام کلرآمفنیکول است که به صورت کپسول خوراکی مورد استفاده قرار می گیرد.بیمار کسل،بی حال،با تب هایی که با فاصله ی زمانی تکرار می شوند موجه می شود.

 

شرح آزمایش:

 

محیطی که ما از آن به عنوان نمونه حاوی باکتری استفاده می کنیم آبگوشت می باشد.

 

 

محیط های کشت ما شامل S.S agar ، TSI ، Simmon citrate می باشد که در ابتدا توضیحاتی مختصر در مورد هر کدام داده شد.

  

 

 

 

 

مقداری از آبگوشت را توسط لوپ سوزنی استریل شده برداشته و آن را به صورت زیگزاگ در محیط های simmon citrate و  TSI agar کشت می دهیم و آن ها را در انکوبه 24 تا 48 ساعت می گذاریم.

همچنین مقداری دیگر نیز از آبگوشت را توسط لوپ استریل شده برداشته و به صورت زیگزاگی در پلیت              

s.s agar کشت می دهیم و آن را در انکوبه به مدت می گذاریم.

 

نتیجه آزمایش:

 

در محیط سیمون سیترات در اثر رشد باکتری محیط آبی رنگ شده است که نشان دهنده مصرف سیترات توسط این باکتری می باشد.(citrate +)

 

 

 

محیط s.s agar ما تولید کلونی های بی رنگ کرده است که نشان می دهد باکتری ما سالمونلا نمی باشد.

 

 

سالمونلا در این محیط تولید کلونی های بی رنگ با مرکز سیاه رنگ می کند.

 

محیط TSI agar ما تغییری در آن ایجاد نشده است که نشان می دهد باکتری ما سالمونلا نمی باشد.

 

 

 

در صورت تغییر این محیط زرد رنگ(زرد و قرمز و سیاه) می شود.

 

 

برای تشخیص باکتری مجهول باید رنگ امیزی شود که در این هفته آزمایش مذکور انجام می شود.

منابع : 

starters.blogfa.com

 http://microbes.blogfa.com & http://www.daneshju

جستجوی M.O های بی هوازی در خاک(کلستریدیوم ها)

مقدمه:

 

1. کلستریدیوم ها:

 

باسیل گرم مثبت درشت اسپوردار بي هوازي اجباري مي باشند . اسپور دراين جنس معمولا انتهايي يانزديك به انتها مي باشد . اغلب متحرك ئداراي فلاژل ازنوع پري تريش مي باشند . تستهاي كاتالاز واكسيداز منفي مي باشد .

كلستريديوم بوتولينوم C.botulinum

عامل بوتوليسم (مسموميت غذايي شديد وكشنده ) باسيل درشتي است كه اسپور آن بيضي شكل ونزديك به انتها قرار دارد . اين باكتري بي هوازي مطلق ومتحرك است .

براي جداسازي باكتريهاي كه اسپوردارند ازروش جداسازي به كمك حرارت استفاده كرد . براي اين منظور بايد نمونه مورد ازمايش رادرسرم فيزيولوژي سوسپانسيون شده وبه مدت 10 دقيقه جوشانده شود تاساير باكتريهاي بدون اسپور ازبين برود ( شوك حرارتي) سپس نمونه رادرشرايط مناسب (بي هوازي براي كلستريديومها) كشت داده وكلنيهاي ارگانيسم راشناسايي كنيد .

از محيطهاي انتخابي EYA (Egg-Yolk agar) و( CBI ( C.botulinum Isolation براي ايزوله كردن كلستريديومبوتولينوم استفاده مي شود .

نكته : براي شناسايي توكسين بوتوليسم ازتست الايزا وراديوايمونواسي وهماگلوتيناسيون پاسيو استفاده كرد .
كلسترديوم تتاني : C. tetani

كلسترديوم تتاني ياباسيل نيكولاير عامل بيماري كزاز مي باشد . اين باكتري بي هوازي اجباري است وداراي اسپورانتهايي بزرگي است كه ظاهري شبيه چوب طبل براي باكتري ايجاد مي كند . اين باكتري متحرك وفلاژل آن ازنوع پري تريش مي باشد . قند هاراتخمير نمي كند وكاتالاز منفي است .

تشخيص آزمايشگاهي :
1- كشت : از محيط تيو گليكولات غني شده ، (Cooked Meat Broth ) CMB و آگار خوندار مي توان جهت كشت استفاده كرد . براي كشت پليت ها بايد به مدت 48 ساعت درشرايط بي هوازي ( ./.80 درصد نيتروژن ، 10درصد گازكربونيك .10 درصد هيدروژن ) در37 درجه سانتيگراد قرار گيرد.
كلستريديوم تتاني درسطح آگار خوندار ايجاد هموليز وسوارمينگ مي كند .

2- تست آگلوتيناسيون : كلني خالص ارگانيسم مورد نظر راباآنتي سرم پلي والان كلستريديوم تتاني مجاور مي كنيم كه درصورت توليد آگلوتيناسيون حضو ركلستريديوم تتاني اثبات مي شود .

كلستريديوم پرفرنژنس C. perfringens :

پرفرنژنس يا باسيل ولشاي عامل اصلي بيماري گانگرن گازي است . اين باكتري بدون حركت وداراي يك اسپور بيضي شكل مركزي يانزديك به انتهاست . وباعث تورم سلول نمي شود . تاكنون 6 گروه آنتي ژني ازكلستريديوم شناسايي شده كه باحروف A تاF نامگذاري شده كه گروهA وگاهي F براي انسان بيماريزايند اسپور اين باكتري در موادغذايي كه حرارت كافي به قسمتهاي مياني ودروني آن نمي رسد وپس پخته شدن مدتي گرم نگهداري مي شوند باقي مانده وچنانچه شرايط وزمان رشد مناسب باشد مي تواند باعث مسموميت شود .

تشخيص آزمايشگاهي :

1_ بررسي ميكروسكوپي : پس ازرنگ آميزي گرم باسيل درشت گرم مثبت بادوانتهاي گرد ، شبيه واگن قطار وبه صورت موازي مشاهده مي شود داراي يك اسپور بيضي شكل انتهايي يا نزديك به انتهاست .

2_ كشت : نمونه رادرآگار خوندار ، تيوگليكولات مي توان كشت داد . پس از 24 ساعت در شرايط هوازي مي توان بررسي كرد كه ’ا برروي آگار خوندار ايجاد هموليز دوگانه مي كند . هموليز بتا درداخل وهموليز آلفا درخارج ايجاد مي گردد . (از محيطهاي كشت اختصاصي نظير Lowbury و Lilly مي توان استفاده كرد .

نكته : كلستريديوم پرفرنژنس درمجاورت هوا زنده مي ماند ومي تواند رشد كند .

تستهاي تشخيصي :

1_ آزمون بررسي ترشح لسيتيناز :

ليسيتيناز باكتري قادر است كه لستين ( ماده طبيعي درزرده تخم مرغ ) رابه دي كيليسريدهاي نامحلول تبديل كند كه منجر به توليد هاله اي سفيد رنگ تامات دراطراف كلني درمحيط كشت حاوي لسيتين مي شود .

روش كار : يك كلني خالص رابرروي محيط كشت آگار زرده تخم مرغ (Egg Yolk Medium) منتقل كنيد سپس پليت رابه مدت 24 تا48 ساعت دردماي 36 درجه سانتيگراد قرار دهيد بعد از اين مدت پليت ها راازنظر كلنيهاي باهاله اي ازرسوب سفيد رنگ بررسي مي شود .

2_ تست نگلر (ممانعت از آلفا لسيتنيناز):

روش كار : ازپليت آگار خوندار با10 درصد زرده تخم مرغ (EYA) استفاده مي شود .به وسيله سواب كلني رادرسطح پليت كشت داده نيمي از سطح محيط كشت راباآنتي توكسين آلفا لسيتيناز بپوشانيد ودردماي 37 درجه سانتيگراد به مدت 24تا 48 ساعت نگهداري كنيد . درنيمه فاقد ضد سم اطراف پرگنه ها هاله كدري مشاهده مي شود ولي در نيمه ديگر هاله موجود نيست كه به علت آنتي توكسين مي باشد .

نكته : تست لسيتيناز دركلستريديوم باراتي ، كلستريديوم بايفر منتاس و كلستريديوم سوردلي نيز مثبت است به همين دليل تست لسيتيناز نمي تواند به تنهايي تائيد كننده قطعي پرفرنژنس باشد وبايد براي تشخيص قطعي ترشح الفا لسيتيناز توسط تست نگلر يررسي شود .

3_ تخمير طوفاني شير : stormy clot

روش كار : مقداري از كلني پرفرنژنس رادرلوله آزمايش حاوي شير تلقيح كرده وسپس به مدت 24 ساعت دردماي 37 درجه سانتيگراد درشرايط بي هواز ي قرار دهيد (ريختن پارافين روي لوله) .شير همراه باتوليد گازوتغيير شكلي بانماي طوفاني منعقد مي شود .

4_  تخمير قندها :مقداري از كلني رادر لوله هاي محتوي محيط پايه فنل رد كه به طور جداگانه 1 درصد ازقندهاي گلوكز، ساكاروز، سالي سين، لاكتوز، مانيتول ومالتوز مي باشند بيفزاييد ، سپس آنها رابه مدت24 ساعت درجار بي هوازي در37 درجه قرار دهيد .
مالتوز +
مانيتول -
سالي سين متغيير
لاكتوز +
ساكاروز +
گلوكز +


نكته : كلستريديوم پرفرنژنس داراي Reverse Camp مثبت است ودرشرايط آزمايشگاهي اسپور توليد نمي كند .

نكته : درتست نگلر آنتي توكسين TYPA پرفرنژنس مورد استفاده قرار مي گيرد .

نكته : سميت توكسين بوتولينوم دربين كلستريديوم تتاني ، كورينه باكتريوم ديفتريه ويرسينيا پستيس از همه قوي تر است .

روش آزمايشگاهي درمواد غذايي : 10گرم ازماده غذايي مشكوك راتوزين كرده وسپس 10 ميلي ليتر محلول بافر فسفات به آن بيفزاييد ودر هاون چيني سترون كاملا يكنواخت كنيد . انگاه دوبطري درپيچ دار محتوي محيط گوشت پخته را انتخاب وآنها رابه مدت 5 دقيقه بادرشل جهت تخليه حبابهاي اكسيژن درحمام آب 80 درجه سانتيگراد قرار دهيد وبعد از خارج كردن ازحمام وكمي سرد شدنبه هريك ازلوله ها 2 الي 3 ميلي ليتراز سوسپانسيون آماده شده نمونه غذايي بيفزاييد ويكي ازدولوله راعلامت گذاري كنيدولوله علامت گذاري شده رابه مدت 10 دقيقه در65 درجه سانتيگراد قرار دهيد سپس2 تا4 ميلي ليتر ازمخلوط وازپار سترون (مخلوط مساوي از وازلين وپارافين )راكه ذوب شده به آهستگي ازكنارلوله طوري بريزيد كه سطح محيط راكاملا فرابگيرد وبعد هردولوله رابه مدت 48 ساعت درگرمخانه 37 درجه سانتيگراد قراردادهوس1س لوله هارابررسي كنيد. درصورت رشد باكتري بخش مايع داخل لوله كدر مي شود .

شمارش درمحيط آگارخوندار بانئومايسين

3 پتري ديش محتوي آگار خوندار انتخاب وبه سطح هريك از آنها مقدار 1/. ميلي ليتر ازمحلول يك درصد نئومايسين رابيفزاييد . پس ازخشك شدن سطح محيط به هريك از آنها يك دهم ميلي ليتر از رقتهاي موردنظر افزوده وتوسط ميله شيشه اي پخش كنيد . سپس دوظرف پتري رادرجار بي هوازي به مدت 48 ساعت در37 درجه سانتيگراد قرار دهيد پليت سوم رابه عنوان شاهد دردماي 37 درجه وشرايط هوازي قرار دهيد . سپس پليت ها راخارج كرده پرگنه ها راشمارش كرده وميانگين تعداد پرگنهايي كه دردو پليت ودر شرايط بي هوازي رشد كرده اند بدست آورده ، سپس تعداد پرگنهايي راكه روي پليت شاهد در شرايط هوازي رشد كرده اند از آن كم كنيد . تعداد رادر رقت مورد آزمايش ضرب كرده وبر حسب گرم ماده غذايي گزارش كنيد .

 

2. میحط های کشت مورد استفاده:

Cooked meat media       تیوگلیکولات براث

blood agar

Cooked meat media :

از این محیط برای کشت به دلیل وجود پارافین بر روی محیط کشت باعث رشد  باکتری های بی هوازی می گردد. این محیط کشت محیط مغذی و غنی برای باکتری های بی هوازی منجمله کلستریدیوم است. این محیط معرف خاصی نداشته، و هدف این است که محیط کشت مناسب برای باکتری های بی هوازی ایجاد نمود.بعد از رشد باکتری برای تفریق باید بر روی محیط های افتراقی با شرایط بی هوازی جهت تشخیص باکتری مورد نظر پرداخت.

تیوگلیکولات براث :

 

اين آبگوشت غني كننده به طور معمول در آزمايشگاههاي ميكروبشناسي مورد استفاده قرار مي‌گيرد. مقدار آگار موجود در محيط تيوگليكولات 075/0 درصد بوده و اين مقدار آگار جهت جلوگيري از ورود جريان اتمسفر حاوي اكسيژن به داخل آبگوشت استفاده شده است. تيوگليكوليك اسيد به عنوان يك عامل احياء كننده جهت پايين آوردن پتانسيل اكسيداسيون احياء در محيط استفاده شده است. با اضافه نمودن تعداد زيادي از فاكتورهاي مغذي مانند كازئين – عصاره مخمر، گوشت، و ويتامين‌ها و غيره به اين محيط، رشد اكثر باكتريهاي پاتوژن تشديد مي‌گردد. ساير مكمل‌هاي غذايي، انديكاتور اكسيداسيون-احياء (Resazorin)، دكستروز، ويتامين K₁ و هِمين (hemin) در فرمولهاي تغيير يافته ديگر به محيط اضافه شده است. تكنولوژيست‌ها در اين محيط مي‌توانند تفاوت بين انتشار باكتريها در محيط را مشاهده نمايند. باسيل‌هاي گرم-منفي اختياري در سراسري محيط پخش مي‌شوند، كوكسي‌هاي گرم – مثبت به صورت توپ باد كرده (puff ball) رشد مي‌كنند و هوازيهاي مطلق مانند سودوموناس و مخمرها به صورت يك لايه نازك در سطح آگار رشد مي‌نمايند. جهت رشد باكتريهاي بيهوازي اگر به محيط تيوگليكولات مكمل هِمين (hemin) به مقدار 5 ميكروگرم در ميلي ليتر و ويتامين K₁ به ميزان 1/0 ميكروگرم در ميلي ليتر و بيكربنات سديم به ميزان 1 ميلي گرم در ميلي ليتر اضافه گردد نتايج بهتري حاصل مي‌گردد.  

 

blood agar :

محیط کشت عمومی است که به منظور تکثیر و جدا سازی باکتریهای بیماریزا بخصوص باکتریهایی که برای رشد به مواد مغذی نیاز دارند، بکار می رود.بعلاوه در این محیط وجود همولیزین در باکتریها را نیز می توان کاوش کرد.

پس از اتوکلاو محیط پایه هنگامی که درجه آن تا حدود 50 درجه سانتیگرا د رسید، خون دفیبرینه گاو را به نسبت 5 تا 7 درصد به آن اضافه نموده و با رعایت شرایط استریل در پلیتهای استریل می ریزیم.

ممکن است بسته به نوع باکتری یکی از سه حالت ذیل مشاهده گردد.

1-همولیز کاملβ:باکتری واجد آنزیم همولیزین بوده واطراف پرگنه منطقه شفافی ایجاد میگردد.                                                        

 

2- همولیز ناقصα:باکتری واجد آنزیم همولیزین بوده ولی نسبت لیز کمتر از 50 درصد می باشد و اطراف پرگنه هاله سبز رنگ ایجاد می گردد.

 

 3-عدم همولیزγ :باکتری فاقد آنزیم همولیزین می باشد.

 

تئوری آزمایش:

 

کلستریدیوم ها میله ای و گرم منفی،بی هوازیند و منشا خاکی دارند . با تخمیر قند CO2 و H2 بوتریک اسید تولید می کنند.اهمیتشان از این جهت است که تولید توکسینی به نام نوروتوکسین می کنند که با جذب از روده بر روی اعصاب تاثیر می گذارد و عضلات غیر ارادی بدن را منقبض می سازد.

با توجه به بی هوازی بودن کلستریدیوم باید بایتسی با ایجاد شرایطی میزان اکسیژن موجود در محیط را به حداقل رسانیم و شرایط خلا را ایجاد کنیم.لذا از روش های Anaerobic jar و candle jar استفاده  می کنیم.

 

Anaerobic jar :

 

The nutrient agar plates employed for routine culturing do not contain reducing agents. They can however be used to culture anaerobes if they are placed inside an anaerobe jar - a chamber from which the oxygen is removed.  Commercially available gas generator packets (e.g. GasPak) are placed in the jar along with plates or tubes containing conventional media destined to be incubated anaerobically.  The introduction of water, along with the palladium catalyst in the lid, induces the generation of hydrogen and carbon dioxide gases.  The hydrogen combines with the oxygen in the jar to produce water.  The lid, of course, is sealed shut.  In order to assure that oxygen actually was removed from the chamber, a strip of paper soaked in methylene blue dye is included in the jar.  It is blue when exposed to oxygen but will become colorless (white) when oxygen is absent. 

ترجمه:

پلیت های نوترینت آگار که در کشت های معمول مورد استفاده هستند فاقد عوامل مقید کننده                         می باشند.البته اگر در محفظه بی هوازی قرار گیرند قادر به استفاده از آن ها نیز هستیم.بسته های تولید کننده گاز تجارتی  مثل (gas pack) همراه با پلیت ها و tube هایی که شامل محیط های تجارتی که بطور بی هوازی انکوبه می شوند قرار می گیرند.ابتدا آب همراه با کاتالیزور پالادیوم در یک صفحه موجبات تولید گازهای CO2  و H2 را فراهم می کند.هیدروژن با اکسیژن تولید آب در محفظه                     می نمایند.درب محفظه نیز محکم باید بسته شده باشد.

به منظور اطمینان از خروج اکسیژن از محیط یک نوار کاغذی خیس متیلن بلو در محفظه قرار داده، زمانی که اکسیژن در محیط باشد آبی رنگ و در غیاب آن سفید خواهد بود.      

 

candle jar :

 

 

The candle jar can be used to decrease the concentration of oxygen in the culture environment.  Bacterial plates or tubes are placed in a jar along with a lighted candle.  The lid is sealed.  As the flame burns, oxgyen decreases and the flame goes out.  Oxygen is present, but at a lower percentage than in the atmosphere. The concentration of carbon dioxide increases as a result of the flame; this is also desirable for many microaerophiles.

ترجمه:

Candle jar می تواند به منظور کاهش غلظت اکسیژن در محیط کشت استفاده شود.بدین صورت که پلیت های باکتریایی  یا tube ها در محفظه که شمع در آن روشن است قرار می گیرند.باید توجه داشته که درب محفظه محکم بسته شده باشد.شعله روش موجبات از بین رفتن اکسیژن و ایجاد شرایط خلا را می نماید.(البته مقداری اکسیژن باقی می ماند اما نه در حد اکسیژن اتمسفر محیط) در نتیجه سوختن شعله مقدار co2 افزایش یافته که به نوبه خود شرایط را برای رشد تعداد زیادی از میکرائروفیل ها مهیا می سازد.

 

 

شرح آزمایش:

 

نمونه آزمایش ما خاک می باشد.محیط های کشت مورد استفاده ما blood agar ، تیوگلیکولات و cooked meat media می باشند.

ابتدا 1 گرم خاک را برداشته و و آن را در tube  هایی حاوی محلول های رقیق کننده می ریزیم و توسط دستگاه شیکر آن را یکنواخت می کنیم.

 

 

در مرحله بعد 1 میلی لیتر از نمونه را به محیط تیوگلیکولات و 1 میلی لیتر نیز به محیط  cooked meat media منتقل کرده ،هشت قطره پارافین روی آن ها می ریزیم.پارافین مانع نفوذ هوا می شود.

مجددا 1 میلی لیتر از نمونه را برداشته و در محیط blood agar  کشت می دهیم.

پس از 24 الی 48 ساعت انکوبه کردن نتایج رشد یا عدم رشد میکروارگانیسم را بررسی می کنیم.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

نتیجه آزمایش:

 

باکتری در blood agar  به صورت شفاف و بی رنگ رشد می کند.برای تشخیص باکتری باید از رنگ آمیزی گرم استفاده کرد.

 

 

در دو محیط تیوگلیکولات و cooked meat media کل محیط کدر شده است و نشان دهنده این است که باکتری ما بی هوازی اختیاری می باشد.

 

 

Cooked meat media                                      تیوگلیکولات

 

منابع:

starters.blogfa.com 

http://www.ivo-nkh.ir

http://microbes.blogfa.com

جستجوی میکروب های آلوده کننده آب

مقدمه:

 

1. آلودگی آب

 

تغییر مواد محلول و یا معلق و یا تغییر درجه حرارت و دیگر خواص فیزیکی ، شیمیایی ، بیولوژیکی آب درحدی که آن را برای مصارفی که برای آن مقرر شده است مضر یا غیر مفید سازد آلودگی آب گفته می شود. برهمین اساس , آلودگی آب در زیر گروه های ذیل طبقه بندی می گردد :

·          آلودگی بیولوژیکی

·          آلودگی شیمیایی

·          آلودگی حرارتی

·         آلودگی فیزیکی 

 

 

آلودگی بیولوژیکی:

 

به دلیل تخلیه مواد آلی و بالا رفتن میزان BOD در فاضلاب اکسیژن منابع آبی مصرف شده و میکروارگانسیم های بی هوازی در چنین محیطی رشد می نمایند بنابراین پس از مدتی بوی نامطبوع سولفید هیدروژن، متان و آمونیاک از آن به مشام رسیده و رنگ آب به مرور تیره می گردد .شاخص اندازه گیری آلودگی بیولوژیکی گروهی از باکتریهای کالیفرمی که اصطلاحاً Ecoli نامیده می شوند میباشد 

 

 

آلودگی شیمیایی :

 

 بالا رفتن میزران COD به دلیل مصرف بعضی از مواد شیمیایی باعث مصرف اکسیژن محلول در آب و از بین رفتن شرایط متعارف زیستی آبزیان میگردد . همچنین تغییرات PH موجب برهم خوردن تعادل اکولوژیک محیط آبی شده و فعل و انفعلات شیمیایی را تسریع مینماید .

افزوده شدن فلزات سنگینی مانند کروم ، نیکل ، سرب و همچنین محصولات فرعی صنایع پلاستیک سازی مانند PCB-Pvc و ضایعات رادیواکتیو و... در دور تسلسل زنجیره غذایی و در ارگانیزمهای بالای هرم غذایی تجمع یافته و اثرات این مواد به صورت بارز در موجودات راس هرم غذایی مانند انسان قابل مشاهد است. (تجمع بیولوژیک)

 

آلودگی حرارتی:

 

به میزان هر 10 درجه سانتیگراد افزایش دما ،متابولیسم آبزیان دو برابر میشود و بنابر این مصرف اکسیژن نیز افزایش مییابد . از طرف دیگر افزایش دمای اب باعث خروج گازهای محلول در آب از جمله اکسیژن میگردد.این دومسئله در کنارهم میتوانند باعث کاهش میزان اکسیژن محلول در آب وازبین رفتن شرایط زیستی برای آبزیان گردند.

 

 

 

آلودگی فیزیکی:

 

ازدیاد مواد معلق باعث افزایش کدورت منابع آبی ودر نتیجه کاهش عبور نور خورشید به اکوسیستم آبی ودر نهایت منتج به کاهش فعالیتهای هوازی در سطوح پایینی اب میگردد.از طرف دگر موادی ازقبیل مواد نفتی ،چربی،روغن ومواد رنگی علاوه بر افزایش COD  که موجب بالارفتن بار آلودگی ورشد میکروارگانیسمهای بیماریزا در محیطهای آبی میگردد با ایجاد لایه نازکی بر سطح آب علاوه بر ایجاد چشم انداز نامطلوب ،مانع انجام عملیات فتوسنتز یا همان اکسیژن گیری آبها می شود.

 

  2. محیط EMB AGAR (محيط ائوزين متيلن بلو)

 

اشيرشيا كولي در محيط EMB باتوليد كلني هايي با جلاي فلزي

يك محيط افتراقي در بردارنده لاكتوز با پپتون وائوزين متيلن بلو است . رنگهاي انيليني موجود در محيط ( ائوزين ، متيلن بلو ) مانع از رشد باكتريهاي گرم ـ مثبت مي شوند .

اين رنگها همچنين در PH اسيدي باهم تركيب شده وايجاد رسوب مي نمايند . بنابراين مي توان از وجود آنها بعنوان شاخصي جهت تخمير لاكتوز و توليد اسيد نيز استفاده نمود .

باكتريها گرم ـ منفي بر اساس تخمير يا عدم تخمير قند لاكتوز كلني هاي صورتي و يا بي رنگ تشكيل مي دهند .

باكتري اشرشيا كلي ( E.coli ) كه لاكتوز را بشدت تخمير نموده و مقدار زيادي اسيد توليد مي نمايد، بر روي اين محيط داراي جلاي فلزي سبزرنگ مي باشد .

كلبسيلا، انتروباكتر، سراشيا كه تخميركنندگان ضعيف لاكتوز هستند بر روي محيط كلني هاي ارغواني توليد مي نمايند .

پروتئوس، سالمونلا، شيگلا كه قادر به تخمير لاكتوز نيستند بر روي اين محيط كلني هاي شفاف ايجاد مي‌كنند .

  3. Brilliant-green Phenol-red Lactose Sucrose Agar (BPLS)

 

 

Escherichia coli on BPLS Agar. The colonies are yellow due to the low pH which is caused by the production of acid during fermentation of lactose and/or sucrose.

           

با توجه به PH  پایین که ناشی از تولید اسید طی فرآیند تخمیر لاکتوز و سوکروز می باشد کلنی های E.coli زرد رنگ می باشند.

 

 

Salmonella on BPLS Agar. The colonies are red because the bacterium does not ferment lactose or sucrose.

 

به دلیل عدم تخمیر لاکتوز و سوکروز کلنی های باکتری سالمونلا به رنگ قرمز مشاهده می شود.

 

 تئوری و شرح آزمایش :

 

برای جستجوی میکروب های آلوده کننده آب از تست شناسایی M.P.N استفاده می کنیم که به شرح زیر می باشد:

9 لوله آزمایش را به سه دسته سه تایی تقسیم می کنیم.

 

                                              گروه اول(2X)                   گروه دوم(X)                 گروه سوم(X)

 

مقدار آب                                 10 میلی لیتر                      1 میلی لیتر                    0.1 میلی لیتر

 

آبگوشت مغذی                               + + +                              + + +                             + + +

 

محلول لاکتوز 20 درصد                   + + +                              _ _ _                            _ _ _

 

محلول لاکتوز 10 درصد                   _ _ _                              + + +                            + + +

 

 

بعد از انجام آزمایش لوله ها را  به مدت 24 ساعت در  Incubator می گذاریم.

پس از این زمان درصورت آلوده بودن آب حباب هایی در لوله های dorham ایجاد می گردد که نشان از رشد میکروارگانیسم می باشد.این حباب ها ناشی از مصرف لاکتوز هستند که تولید گاز می کنند.

** لوله dorham : لوله های ریزی می باشند که به صورت واژگون در لوله های آزمایش قرار دارند.

عدم وجود حباب حاکی از ان است که آب ما عاری از میکروارگانیسم می باشد.

در صورت مثبت بودن رشد میکروارگانیسم باکتری موجود را در محیط EMB AGAR کشت می دهیم و آن را در دمای 35 درجه سانتی گراد و به مدت 48 ساعت در incubator می گذاریم.

در صورت وجود کلنی های سبز رنگ باکتری مورد نظر E.coli  و در صورت وجود کلنی های صورتی،لزج و نرم باکتری ما می تواند گستره ای از کلستریدیوم ها خصوصا گونه پرفریجنس،انتروکوک ها و استرپتوکوک های انتروکوکی باشند.

** روش استاندارد این آزمایش کشت باکتری در محیط birillinat green agar در دمای 44 درجه سانتی گراد و طیف زمانی 48 ساعت انجام می گیرد.

 

نتیجه آزمایش:

در هیچ یک از لوله های آزمایش ما حباب تشکیل نشد.به عبارت دیگر آب مورد آزمایش سالم بوده و هیچ میکروارگانیسمی در ان وجود نداشته است.پس نیازی به ادامه مراحل آزمایش که کشت باکتری در محیط کشت می باشد نیست.

منابع:

http://www.jlindquist.net

http://www.microbiologyatlas.kvl.dk

 starters.blogfa.com

جستجوی سالمونلا در فرآورده های گوشتی

مقدمه:

 

1) در مورد سالمونلا:

  سالمونلا باکتري گرم منفي است که در جوجه‌ها و تخم‌مرغها معمولاً وجود دارد. سالمونلا عامل يکي از شايعترين مسموميتهاي غذايي مي‌باشد. سالمونلا مي‌‌تواند تخمدانهاي پرنده را آلوده کند و قبل از تخم گذاردن پرنده، وارد تخم مرغ شود يا اينکه بهنگام تخم گذاردن پرنده به پيوسته تخم مرغ نفوذ کند. سالمونلا با پختن غذا از بين مي‌رود ولي غذاهايي که حاوي تخم مرغ خام هستند (مانند سس مايونز) مشکل‌ساز خواهند بود.

اين بيماري از طريق تماس با پوست برخي از دوزيستان مثل لاک‌پشت نيز قابل انتقال است.

سالمونلا در تخم مرغ :

سالمونلوسيس كه عامل آن اس.پولوروم ( s . Pullorum) است ، بيماري شناخته شده ماكيان است. اكنون سالهاست كه اين بيماري تقريباً در همه كشور ها تحت كنترل است و اين ميكروب بنظر مي رسد مسئله اي عليه عموم بوده باشد . اما عفونت هاي ساب كلينيكي ( sub- clinic ) ماكيان توسط گونه هاي ديگر سالمونلا همچنين وجود ناقلين بين آنها به خصوص مرغها ، يكي از عوامل اصلي سرايت ميكروب در مسموميت غذايي انسان در سطح جهان است . تخم مرغ بطور طبيعي طوري ساخته شده است كه حفاظ مؤثري ( پوسته ) در برابر ورود هر چه زيانبار از جمله ميكروبها داراست و بنابراين داخل تخم مرغ هنگام تولد ان بطور طبيعي استريل است و باكتري ها از قبيل سالمونلا در روده و حفره ابتداي روده ( cecum ) وجود دارند . قسمت پوسته هنگام تولد تخم آلوده شده و آلودگي ميكروبي در تمام مراحل تا آنگاه كه جوجه پوسته را مي شكند ، وجود دارد . جوجه با نوك زدن به پوسته تخم بدنيا مي آيد و سيستم تغذيه اي جوجه به اين وسيله از پوسته آلوده با سالمونلا آلوده ميشود . تغييرات تدريجي در تيپ هاي ( serotype ) سالمونلا در دسته ماكيان در هر زمان وجود دارد . اين طور كه سروتيپ موجود به آرامي از بين مي رود و از غذاي آلوده يا منابع ديگر ، ميكروب جديد جانشين آن ميشود . اين جانشيني ميكروبي عموماً به انسان رسيده باعث آلودگي غذايي و مسموميت مي گردد . بين سال هاي 1987 و 1990 آلودگي گسترده از سالمونلا اينتريتيديس ( Enteritidis ) در آمريكا و انگليس و جاهاي ديگر وجود داشت . پيدا شدن يك تخم مرغ كه از داخل توسط اين ميكروب آلوده بود ، زنگ خطر را بصدا درآورد و موجب نگراني توليدكنندگان تخم مرغ گرديد . بعد از آن هنوز اين اتفاق تكرار نشده است اما بدگماني عمومي بمدت زيادي وجود خواهد داشت .

 

سالمونلا

باسیل گرم منفی – بدون کپسول  - متحرک (فلاژله پری‌تریش) -  مقاوم برابر عوامل شیمیایی و فیزیکی (سروتیپ کلراسوئیس برای تعیین کفایت دستگاه استریل)

بی‌هوازی اختیاری -  کلونی  Sمحدب آبدار با سطح صاف خاکستری – در EMB کلونی‌های لاکتوز منفی بی‌رنگ – محیط انتخابی SS، BG و BS

کاتالاز مثبت - اکسیداز منفی – عدم تخمیر لاکتوز – تولید گاز (به جز تیفی)  - تست لیزین دکربوکسیلاز مثبت – متغیر در مصرف سیترات و تولید H2S

 

2) در مورد محیط های کشت مورد استفاده در این آزمایش:

 

الف) محيط سالمونلا ـ شيگلا (s.s) :

در محيط S.s تركيباتي مانند پپتون ، لاكتوز ، املاح صفراوي ، نوترال رد، آگار، بريلين گرين ، تيو سولفات سديم وجود دارد . اين محيط فقط اجازه رشد به باكتري هاي سالمونلا و شيگلا را مي دهد . بريلين گرين موجود در محيط مانع رشد باكتريهاي گرم ـ مثبت و ديگر گرم منفي ها در محيط S.s مي شود . با استفاده از اين محيط مي‌توان سوشهاي تخمير كننده لاكتوز را از سوشهايي كه توانايي تخمير لاكتوز را ندارند، تشخيص داد .

سالمونلا ، شيگلا قادر به تخمير لاكتوز نبوده، درمحيط S.s كلني هاي بي رنگ ايجاد مي كنند كه ارزش تشخيصي دارد .

 

طرز تهيه :

 

براي ساخت اين محيط مقدار مورد نياز پودر S.s را در آب مقطر ريخته و به حجم مي رسانيد آنگاه بوسيله جوشاندن پودر را در آب مقطر كاملاً حل مي‌كنيد . اين محيط احتياج به اتوكلاو ندارد .

 

ب) محیط کشت اسلنت تریپل شوگر آیرون آگار(Triple Sugar Iron agar slant (TSI slant:

 

:Control organisms
E.COLI: A/A(G)

Shigella felexneri: K/A

Proteus vugaris: K/A,H2S

 Pseudomonas aeruginosa: K/N

Ancubate: Aerobic 35° C, 24  hrs
shelf life: 8 week

Price(baht): (5 return tube)

 

محیط 3 قندی است که به صورت مارپیچ کشت می دهیم.بسته به زرد شدن سطح یا عمق یا کل لوله قند مصرفی را شناسایی کنیم.گلوگز+(بالای محیط) ،  فروکتوز+(پایین محیط) ، ساکارز+(کل محیط)

 

ج) :Simmon citrate

 

 

باکتری در اثر مصرف سیترات محیط سبز زنگ را به آبی رنگ تبدیل می کند.

 

تئوری آزمایش:

 

سالمونلا باکتری هایی میله ای،گرم منفی،دارای فلاژله ازز نوع مژک،اسپور تولید نمیکنند،گلوکز مصرف می کنند،مصرف کننده لاکتوز و ساکارز نیستند،منشا روده ای دارند و به عنوان باکتری های مدفوعی شناخته می شود.از تخم مرغ،گوشت های قرمز کشتار شده به روش های غیر بهداشتی جدا شده اند.

می توانند در انسان اگر به تعداد کافی وارد بدن شوند از طریق دما مسمومیت ایجاد کنند.قبلا با توجه به مسمومیتی که در موجود هدف بوجود می آوردند دسته بندی می شدند اما امروزه بر مبنای سه آنتی زن سطحی یا سوماتیک(o) ، آنتی ژن فلاژله ای(H) و آنتی ژن کپسولی(Vi) دسته بندی می شوند.هر دسته یه زیر گروه هایی تقسیم می شود که از لحاظ سرولوژیکی با همدیگر تفوت دارند که این گروه ها را سرووار یا سروتیپ می گویند و هکرام از سرووار ها نیز با هم تفات دارند که بیووار یا بیوتیپ گفته می شوند.

در ارتباط با مسمومیت شاخصی تحت عنوان پاتوژنیسه(شاخص بیماری زایی) معرفی می شود که عبارت است از نسبت تعداد افراد با علایم بیماری به تعداد کل افراد مجاور شده با عامل بیماری.

این قدرت بیماری زایی در به وجود امدن علایم بیماری نقش مهمی دارد.هر چه باکتری قدرت بیماری زایی بالاتری داشته باشد تعدادی که توانایی ایجاد بیماری در فرد را دارد کم است و هرچه قدرت بیماری زایی کمتر باشد بایستی تعداد بیشتری میکروارگانیسم وارد بدن شوند تا بتوانند ایجاد مسمومیت کنند.مسمومیت با ایجاد درد در ناحیه شکم به شکل تهوع،استفراغ و در مراحل شدید تر اسهال بروز می کند.طول دوره بیماری 2 تا 8 روز می باشد که می تواند طولانی تر هم باشد.

درمان بوسیله ی آنتی بیوتیکی به نام کلرآمفنیکول است که به صورت کپسول خوراکی مورد استفاده قرار می گیرد.بیمار کسل،بی حال،با تب هایی که با فاصله ی زمانی تکرار می شوند موجه می شود.

 

شرح آزمایش:

 

محیطی که ما از آن به عنوان نمونه حاوی باکتری استفاده می کنیم آبگوشت می باشد.

 

 

محیط های کشت ما شامل S.S agar ، TSI ، Simmon citrate می باشد که در ابتدا توضیحاتی مختصر در مورد هر کدام داده شد.

  

 

 

 

 

مقداری از آبگوشت را توسط لوپ سوزنی استریل شده برداشته و آن را به صورت زیگزاگ در محیط های simmon citrate و  TSI agar کشت می دهیم و آن ها را در انکوبه 24 تا 48 ساعت می گذاریم.

همچنین مقداری دیگر نیز از آبگوشت را توسط لوپ استریل شده برداشته و به صورت زیگزاگی در پلیت              

s.s agar کشت می دهیم و آن را در انکوبه به مدت می گذاریم.

 

نتیجه آزمایش:

 

در محیط سیمون سیترات در اثر رشد باکتری محیط آبی رنگ شده است که نشان دهنده مصرف سیترات توسط این باکتری می باشد.(citrate +)

 

 

 

محیط s.s agar ما تولید کلونی های بی رنگ کرده است که نشان می دهد باکتری ما سالمونلا نمی باشد.

 

 

سالمونلا در این محیط تولید کلونی های بی رنگ با مرکز سیاه رنگ می کند.

 

محیط TSI agar ما تغییری در آن ایجاد نشده است که نشان می دهد باکتری ما سالمونلا نمی باشد.

 

 

 

در صورت تغییر این محیط زرد رنگ(زرد و قرمز و سیاه) می شود.

 

 

برای تشخیص باکتری مجهول باید رنگ امیزی شود که در این هفته آزمایش مذکور انجام می شود.

منابع : 

starters.blogfa.com

 http://microbes.blogfa.com & http://www.daneshju

جستجوی M.O های بی هوازی در خاک(کلستریدیوم ها)

مقدمه:

 

1. کلستریدیوم ها:

 

باسیل گرم مثبت درشت اسپوردار بي هوازي اجباري مي باشند . اسپور دراين جنس معمولا انتهايي يانزديك به انتها مي باشد . اغلب متحرك ئداراي فلاژل ازنوع پري تريش مي باشند . تستهاي كاتالاز واكسيداز منفي مي باشد .

كلستريديوم بوتولينوم C.botulinum

عامل بوتوليسم (مسموميت غذايي شديد وكشنده ) باسيل درشتي است كه اسپور آن بيضي شكل ونزديك به انتها قرار دارد . اين باكتري بي هوازي مطلق ومتحرك است .

براي جداسازي باكتريهاي كه اسپوردارند ازروش جداسازي به كمك حرارت استفاده كرد . براي اين منظور بايد نمونه مورد ازمايش رادرسرم فيزيولوژي سوسپانسيون شده وبه مدت 10 دقيقه جوشانده شود تاساير باكتريهاي بدون اسپور ازبين برود ( شوك حرارتي) سپس نمونه رادرشرايط مناسب (بي هوازي براي كلستريديومها) كشت داده وكلنيهاي ارگانيسم راشناسايي كنيد .

از محيطهاي انتخابي EYA (Egg-Yolk agar) و( CBI ( C.botulinum Isolation براي ايزوله كردن كلستريديومبوتولينوم استفاده مي شود .

نكته : براي شناسايي توكسين بوتوليسم ازتست الايزا وراديوايمونواسي وهماگلوتيناسيون پاسيو استفاده كرد .
كلسترديوم تتاني : C. tetani

كلسترديوم تتاني ياباسيل نيكولاير عامل بيماري كزاز مي باشد . اين باكتري بي هوازي اجباري است وداراي اسپورانتهايي بزرگي است كه ظاهري شبيه چوب طبل براي باكتري ايجاد مي كند . اين باكتري متحرك وفلاژل آن ازنوع پري تريش مي باشد . قند هاراتخمير نمي كند وكاتالاز منفي است .

تشخيص آزمايشگاهي :
1- كشت : از محيط تيو گليكولات غني شده ، (Cooked Meat Broth ) CMB و آگار خوندار مي توان جهت كشت استفاده كرد . براي كشت پليت ها بايد به مدت 48 ساعت درشرايط بي هوازي ( ./.80 درصد نيتروژن ، 10درصد گازكربونيك .10 درصد هيدروژن ) در37 درجه سانتيگراد قرار گيرد.
كلستريديوم تتاني درسطح آگار خوندار ايجاد هموليز وسوارمينگ مي كند .

2- تست آگلوتيناسيون : كلني خالص ارگانيسم مورد نظر راباآنتي سرم پلي والان كلستريديوم تتاني مجاور مي كنيم كه درصورت توليد آگلوتيناسيون حضو ركلستريديوم تتاني اثبات مي شود .

كلستريديوم پرفرنژنس C. perfringens :

پرفرنژنس يا باسيل ولشاي عامل اصلي بيماري گانگرن گازي است . اين باكتري بدون حركت وداراي يك اسپور بيضي شكل مركزي يانزديك به انتهاست . وباعث تورم سلول نمي شود . تاكنون 6 گروه آنتي ژني ازكلستريديوم شناسايي شده كه باحروف A تاF نامگذاري شده كه گروهA وگاهي F براي انسان بيماريزايند اسپور اين باكتري در موادغذايي كه حرارت كافي به قسمتهاي مياني ودروني آن نمي رسد وپس پخته شدن مدتي گرم نگهداري مي شوند باقي مانده وچنانچه شرايط وزمان رشد مناسب باشد مي تواند باعث مسموميت شود .

تشخيص آزمايشگاهي :

1_ بررسي ميكروسكوپي : پس ازرنگ آميزي گرم باسيل درشت گرم مثبت بادوانتهاي گرد ، شبيه واگن قطار وبه صورت موازي مشاهده مي شود داراي يك اسپور بيضي شكل انتهايي يا نزديك به انتهاست .

2_ كشت : نمونه رادرآگار خوندار ، تيوگليكولات مي توان كشت داد . پس از 24 ساعت در شرايط هوازي مي توان بررسي كرد كه ’ا برروي آگار خوندار ايجاد هموليز دوگانه مي كند . هموليز بتا درداخل وهموليز آلفا درخارج ايجاد مي گردد . (از محيطهاي كشت اختصاصي نظير Lowbury و Lilly مي توان استفاده كرد .

نكته : كلستريديوم پرفرنژنس درمجاورت هوا زنده مي ماند ومي تواند رشد كند .

تستهاي تشخيصي :

1_ آزمون بررسي ترشح لسيتيناز :

ليسيتيناز باكتري قادر است كه لستين ( ماده طبيعي درزرده تخم مرغ ) رابه دي كيليسريدهاي نامحلول تبديل كند كه منجر به توليد هاله اي سفيد رنگ تامات دراطراف كلني درمحيط كشت حاوي لسيتين مي شود .

روش كار : يك كلني خالص رابرروي محيط كشت آگار زرده تخم مرغ (Egg Yolk Medium) منتقل كنيد سپس پليت رابه مدت 24 تا48 ساعت دردماي 36 درجه سانتيگراد قرار دهيد بعد از اين مدت پليت ها راازنظر كلنيهاي باهاله اي ازرسوب سفيد رنگ بررسي مي شود .

2_ تست نگلر (ممانعت از آلفا لسيتنيناز):

روش كار : ازپليت آگار خوندار با10 درصد زرده تخم مرغ (EYA) استفاده مي شود .به وسيله سواب كلني رادرسطح پليت كشت داده نيمي از سطح محيط كشت راباآنتي توكسين آلفا لسيتيناز بپوشانيد ودردماي 37 درجه سانتيگراد به مدت 24تا 48 ساعت نگهداري كنيد . درنيمه فاقد ضد سم اطراف پرگنه ها هاله كدري مشاهده مي شود ولي در نيمه ديگر هاله موجود نيست كه به علت آنتي توكسين مي باشد .

نكته : تست لسيتيناز دركلستريديوم باراتي ، كلستريديوم بايفر منتاس و كلستريديوم سوردلي نيز مثبت است به همين دليل تست لسيتيناز نمي تواند به تنهايي تائيد كننده قطعي پرفرنژنس باشد وبايد براي تشخيص قطعي ترشح الفا لسيتيناز توسط تست نگلر يررسي شود .

3_ تخمير طوفاني شير : stormy clot

روش كار : مقداري از كلني پرفرنژنس رادرلوله آزمايش حاوي شير تلقيح كرده وسپس به مدت 24 ساعت دردماي 37 درجه سانتيگراد درشرايط بي هواز ي قرار دهيد (ريختن پارافين روي لوله) .شير همراه باتوليد گازوتغيير شكلي بانماي طوفاني منعقد مي شود .

4_  تخمير قندها :مقداري از كلني رادر لوله هاي محتوي محيط پايه فنل رد كه به طور جداگانه 1 درصد ازقندهاي گلوكز، ساكاروز، سالي سين، لاكتوز، مانيتول ومالتوز مي باشند بيفزاييد ، سپس آنها رابه مدت24 ساعت درجار بي هوازي در37 درجه قرار دهيد .
مالتوز +
مانيتول -
سالي سين متغيير
لاكتوز +
ساكاروز +
گلوكز +


نكته : كلستريديوم پرفرنژنس داراي Reverse Camp مثبت است ودرشرايط آزمايشگاهي اسپور توليد نمي كند .

نكته : درتست نگلر آنتي توكسين TYPA پرفرنژنس مورد استفاده قرار مي گيرد .

نكته : سميت توكسين بوتولينوم دربين كلستريديوم تتاني ، كورينه باكتريوم ديفتريه ويرسينيا پستيس از همه قوي تر است .

روش آزمايشگاهي درمواد غذايي : 10گرم ازماده غذايي مشكوك راتوزين كرده وسپس 10 ميلي ليتر محلول بافر فسفات به آن بيفزاييد ودر هاون چيني سترون كاملا يكنواخت كنيد . انگاه دوبطري درپيچ دار محتوي محيط گوشت پخته را انتخاب وآنها رابه مدت 5 دقيقه بادرشل جهت تخليه حبابهاي اكسيژن درحمام آب 80 درجه سانتيگراد قرار دهيد وبعد از خارج كردن ازحمام وكمي سرد شدنبه هريك ازلوله ها 2 الي 3 ميلي ليتراز سوسپانسيون آماده شده نمونه غذايي بيفزاييد ويكي ازدولوله راعلامت گذاري كنيدولوله علامت گذاري شده رابه مدت 10 دقيقه در65 درجه سانتيگراد قرار دهيد سپس2 تا4 ميلي ليتر ازمخلوط وازپار سترون (مخلوط مساوي از وازلين وپارافين )راكه ذوب شده به آهستگي ازكنارلوله طوري بريزيد كه سطح محيط راكاملا فرابگيرد وبعد هردولوله رابه مدت 48 ساعت درگرمخانه 37 درجه سانتيگراد قراردادهوس1س لوله هارابررسي كنيد. درصورت رشد باكتري بخش مايع داخل لوله كدر مي شود .

شمارش درمحيط آگارخوندار بانئومايسين

3 پتري ديش محتوي آگار خوندار انتخاب وبه سطح هريك از آنها مقدار 1/. ميلي ليتر ازمحلول يك درصد نئومايسين رابيفزاييد . پس ازخشك شدن سطح محيط به هريك از آنها يك دهم ميلي ليتر از رقتهاي موردنظر افزوده وتوسط ميله شيشه اي پخش كنيد . سپس دوظرف پتري رادرجار بي هوازي به مدت 48 ساعت در37 درجه سانتيگراد قرار دهيد پليت سوم رابه عنوان شاهد دردماي 37 درجه وشرايط هوازي قرار دهيد . سپس پليت ها راخارج كرده پرگنه ها راشمارش كرده وميانگين تعداد پرگنهايي كه دردو پليت ودر شرايط بي هوازي رشد كرده اند بدست آورده ، سپس تعداد پرگنهايي راكه روي پليت شاهد در شرايط هوازي رشد كرده اند از آن كم كنيد . تعداد رادر رقت مورد آزمايش ضرب كرده وبر حسب گرم ماده غذايي گزارش كنيد .

 

2. میحط های کشت مورد استفاده:

Cooked meat media       تیوگلیکولات براث

blood agar

Cooked meat media :

از این محیط برای کشت به دلیل وجود پارافین بر روی محیط کشت باعث رشد  باکتری های بی هوازی می گردد. این محیط کشت محیط مغذی و غنی برای باکتری های بی هوازی منجمله کلستریدیوم است. این محیط معرف خاصی نداشته، و هدف این است که محیط کشت مناسب برای باکتری های بی هوازی ایجاد نمود.بعد از رشد باکتری برای تفریق باید بر روی محیط های افتراقی با شرایط بی هوازی جهت تشخیص باکتری مورد نظر پرداخت.

تیوگلیکولات براث :

 

اين آبگوشت غني كننده به طور معمول در آزمايشگاههاي ميكروبشناسي مورد استفاده قرار مي‌گيرد. مقدار آگار موجود در محيط تيوگليكولات 075/0 درصد بوده و اين مقدار آگار جهت جلوگيري از ورود جريان اتمسفر حاوي اكسيژن به داخل آبگوشت استفاده شده است. تيوگليكوليك اسيد به عنوان يك عامل احياء كننده جهت پايين آوردن پتانسيل اكسيداسيون احياء در محيط استفاده شده است. با اضافه نمودن تعداد زيادي از فاكتورهاي مغذي مانند كازئين – عصاره مخمر، گوشت، و ويتامين‌ها و غيره به اين محيط، رشد اكثر باكتريهاي پاتوژن تشديد مي‌گردد. ساير مكمل‌هاي غذايي، انديكاتور اكسيداسيون-احياء (Resazorin)، دكستروز، ويتامين K₁ و هِمين (hemin) در فرمولهاي تغيير يافته ديگر به محيط اضافه شده است. تكنولوژيست‌ها در اين محيط مي‌توانند تفاوت بين انتشار باكتريها در محيط را مشاهده نمايند. باسيل‌هاي گرم-منفي اختياري در سراسري محيط پخش مي‌شوند، كوكسي‌هاي گرم – مثبت به صورت توپ باد كرده (puff ball) رشد مي‌كنند و هوازيهاي مطلق مانند سودوموناس و مخمرها به صورت يك لايه نازك در سطح آگار رشد مي‌نمايند. جهت رشد باكتريهاي بيهوازي اگر به محيط تيوگليكولات مكمل هِمين (hemin) به مقدار 5 ميكروگرم در ميلي ليتر و ويتامين K₁ به ميزان 1/0 ميكروگرم در ميلي ليتر و بيكربنات سديم به ميزان 1 ميلي گرم در ميلي ليتر اضافه گردد نتايج بهتري حاصل مي‌گردد.  

 

blood agar :

محیط کشت عمومی است که به منظور تکثیر و جدا سازی باکتریهای بیماریزا بخصوص باکتریهایی که برای رشد به مواد مغذی نیاز دارند، بکار می رود.بعلاوه در این محیط وجود همولیزین در باکتریها را نیز می توان کاوش کرد.

پس از اتوکلاو محیط پایه هنگامی که درجه آن تا حدود 50 درجه سانتیگرا د رسید، خون دفیبرینه گاو را به نسبت 5 تا 7 درصد به آن اضافه نموده و با رعایت شرایط استریل در پلیتهای استریل می ریزیم.

ممکن است بسته به نوع باکتری یکی از سه حالت ذیل مشاهده گردد.

1-همولیز کاملβ:باکتری واجد آنزیم همولیزین بوده واطراف پرگنه منطقه شفافی ایجاد میگردد.                                                        

 

2- همولیز ناقصα:باکتری واجد آنزیم همولیزین بوده ولی نسبت لیز کمتر از 50 درصد می باشد و اطراف پرگنه هاله سبز رنگ ایجاد می گردد.

 

 3-عدم همولیزγ :باکتری فاقد آنزیم همولیزین می باشد.

 

تئوری آزمایش:

 

کلستریدیوم ها میله ای و گرم منفی،بی هوازیند و منشا خاکی دارند . با تخمیر قند CO2 و H2 بوتریک اسید تولید می کنند.اهمیتشان از این جهت است که تولید توکسینی به نام نوروتوکسین می کنند که با جذب از روده بر روی اعصاب تاثیر می گذارد و عضلات غیر ارادی بدن را منقبض می سازد.

با توجه به بی هوازی بودن کلستریدیوم باید بایتسی با ایجاد شرایطی میزان اکسیژن موجود در محیط را به حداقل رسانیم و شرایط خلا را ایجاد کنیم.لذا از روش های Anaerobic jar و candle jar استفاده  می کنیم.

 

Anaerobic jar :

 

The nutrient agar plates employed for routine culturing do not contain reducing agents. They can however be used to culture anaerobes if they are placed inside an anaerobe jar - a chamber from which the oxygen is removed.  Commercially available gas generator packets (e.g. GasPak) are placed in the jar along with plates or tubes containing conventional media destined to be incubated anaerobically.  The introduction of water, along with the palladium catalyst in the lid, induces the generation of hydrogen and carbon dioxide gases.  The hydrogen combines with the oxygen in the jar to produce water.  The lid, of course, is sealed shut.  In order to assure that oxygen actually was removed from the chamber, a strip of paper soaked in methylene blue dye is included in the jar.  It is blue when exposed to oxygen but will become colorless (white) when oxygen is absent. 

ترجمه:

پلیت های نوترینت آگار که در کشت های معمول مورد استفاده هستند فاقد عوامل مقید کننده                         می باشند.البته اگر در محفظه بی هوازی قرار گیرند قادر به استفاده از آن ها نیز هستیم.بسته های تولید کننده گاز تجارتی  مثل (gas pack) همراه با پلیت ها و tube هایی که شامل محیط های تجارتی که بطور بی هوازی انکوبه می شوند قرار می گیرند.ابتدا آب همراه با کاتالیزور پالادیوم در یک صفحه موجبات تولید گازهای CO2  و H2 را فراهم می کند.هیدروژن با اکسیژن تولید آب در محفظه                     می نمایند.درب محفظه نیز محکم باید بسته شده باشد.

به منظور اطمینان از خروج اکسیژن از محیط یک نوار کاغذی خیس متیلن بلو در محفظه قرار داده، زمانی که اکسیژن در محیط باشد آبی رنگ و در غیاب آن سفید خواهد بود.      

 

candle jar :

 

 

The candle jar can be used to decrease the concentration of oxygen in the culture environment.  Bacterial plates or tubes are placed in a jar along with a lighted candle.  The lid is sealed.  As the flame burns, oxgyen decreases and the flame goes out.  Oxygen is present, but at a lower percentage than in the atmosphere. The concentration of carbon dioxide increases as a result of the flame; this is also desirable for many microaerophiles.

ترجمه:

Candle jar می تواند به منظور کاهش غلظت اکسیژن در محیط کشت استفاده شود.بدین صورت که پلیت های باکتریایی  یا tube ها در محفظه که شمع در آن روشن است قرار می گیرند.باید توجه داشته که درب محفظه محکم بسته شده باشد.شعله روش موجبات از بین رفتن اکسیژن و ایجاد شرایط خلا را می نماید.(البته مقداری اکسیژن باقی می ماند اما نه در حد اکسیژن اتمسفر محیط) در نتیجه سوختن شعله مقدار co2 افزایش یافته که به نوبه خود شرایط را برای رشد تعداد زیادی از میکرائروفیل ها مهیا می سازد.

 

 

شرح آزمایش:

 

نمونه آزمایش ما خاک می باشد.محیط های کشت مورد استفاده ما blood agar ، تیوگلیکولات و cooked meat media می باشند.

ابتدا 1 گرم خاک را برداشته و و آن را در tube  هایی حاوی محلول های رقیق کننده می ریزیم و توسط دستگاه شیکر آن را یکنواخت می کنیم.

 

 

در مرحله بعد 1 میلی لیتر از نمونه را به محیط تیوگلیکولات و 1 میلی لیتر نیز به محیط  cooked meat media منتقل کرده ،هشت قطره پارافین روی آن ها می ریزیم.پارافین مانع نفوذ هوا می شود.

مجددا 1 میلی لیتر از نمونه را برداشته و در محیط blood agar  کشت می دهیم.

پس از 24 الی 48 ساعت انکوبه کردن نتایج رشد یا عدم رشد میکروارگانیسم را بررسی می کنیم.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

نتیجه آزمایش:

 

باکتری در blood agar  به صورت شفاف و بی رنگ رشد می کند.برای تشخیص باکتری باید از رنگ آمیزی گرم استفاده کرد.

 

 

در دو محیط تیوگلیکولات و cooked meat media کل محیط کدر شده است و نشان دهنده این است که باکتری ما بی هوازی اختیاری می باشد.

 

 

Cooked meat media                                      تیوگلیکولات

 

منابع:

starters.blogfa.com 

http://www.ivo-nkh.ir

http://microbes.blogfa.com

ما الشعير، آبجوي حلال

چندین هزار سال پیش در مصر باستان از نوشيدني‌اي تحت عنوان آبجو استفاده مي‌شده كه همزمان با آن يك نوع نوشیدنی الكلي با همان خصوصیات كه از ارزن تهیه مي‌شد در ميان قبایل آفريقايي رواج پیدا كرد.مصريان نيز فرآيند توليد را به‌گونه‌اي تغيير دادند كه در نوشيدني آبجو آنها الكل توليد شود.به تدریج اين نوشیدنی الکلی در تمام نقاط دنیا رایج و در همه كشور‌ها تولید شد.

 

ادامه مطلب

اندازهگیری نمک با روش ولهارد

تئوری آزمایش:

 

تعیین یون کلرید به روش ولهارد

کاربرد روش ولهارد: برای هالوژن هایی که psk آن ها از تیوسیونات نقره کمتر است.
اگر حلالیت رسوب هالید نقره کمتر از تیوسیانات نقره باشد مازاد نقره را می توان مستقیما"باپتاسیم تیوسیانات تیتر نمود این مورد در حالتی است که هالیدوبرمید یا یدید باشد صادق است .ولی حلالیت کلرید نقره بیش از نیوسیانات نقره بوده است وباید با صاف کردن ان را جدا نمود تا حین تیتراسیون به تیوسیانات نقره تبدیل نگردد .

برای سرعت عمل می توان به جای صاف کردن رسوب کلرید نقره به محلول نیتروبنزن یا تتراکلریدکربن با نیتروبنزن سبب انقعاد وپوشیده شدن رسوب کلرید نقره گردیده به طوری که از واکنش ان با لایه ابگین محلول درحین تیتراسیون جلوگیری می نماید مازاد نیترات نقره در لایه ابگین باقی مانده وتوسط تیوسیانات نقره استاندارد تیتر میگردد.

 

نکاتی در خور توجه:

*در اندازه گیری یدونقره باید معرف یون فریک پس از افزایش نیترات نقره اضافی به محلول انجام شود در غیر این صورت مطابق واکنش اهن فریک مقداری ید در داخل محلول ازاد کرده ومانع انجام واکنش می شود.

*یکی از بزرگترین محاسن روش ولهارد آنست که می توان آن را جهت اندازه گیری هالید ها در محلول هایی که نسبتا"اسیدی قوی هستند به کار برد در حالی که در روش مور در این زمینه محدودیت وجود دارد.

 

*علت اضافه کردن اسید نیتریک: چون غیر از یون کلرید ممکن است آنیون های دیگری مثل کربنات مزاحم باشد و برای از بین بردن آن ها از اسید نیتریک استفاده می کنیم.

*علت صاف کردن: برای جلوگیری از ترکیب شدن نقره کلرید با تیوسیونات

وسایل و مواد لازم:

 ارلن،استوانه مدرج،پی پت،بورت،محلول آمونیوم تیو سیانات،آمونیم فریک سولفات،محلول نقره نیترات،اسید نیتریکN6،کاغذ صافی

 

شرح کار:

 

مرحله اول:

ابتدا محلول آمونیوم تیوسینات را به روش زیر استاندارد کنید:

10 میلی لیتر محلول N0.1 نقره نیترات را در ارلن وارد کنید و به 100 میلی لیتر آب مقطر و حدود 4-2 میلی لیترمعرف آمونیم فریک سولفات اضافه کنید و محلول را با هم زدن با آمونیوم تیو سیانات تا رنگ قرمز پایدار تیتر کنید.

 

محاسبات:

 

 3AgNO V  X3AgNO N = آمونیوم تیوسیونات V  X آمونیوم تیوسیونات N

ml 5 X L/mol 0.1 = lm 16.5  X آمونیوم تیوسیونات N

L/mol  0.03 = آمونیوم تیوسیونات N

 

مرحله دوم:

در یک ارلن 10 میلی لیتر نمونه مجهول همراه با 2 میلی لیتر اسید نیتریک و   4-2 میلی لیتر آمونیوم فریک سولفات و 50 میلی لیتر  آب مقطر به همراه 15 میلی لیتر نقره نیترات اضافی را اضافه کرده و سپس محلول را صاف کنید و محلول زیر صافی را با آمونیوم تیوسیانات استاندارد تا ایجاد رنگ قرمز پایدار تیتر کنید .

محاسبات:

 

                           ml 9  =     ml 6 - ml 15= آمونیوم تیوسیونات V - 3AgNOV           

9 میلی لیتر حجم یون نقره ای است که با یون کلرید واکنش می دهد.

n / M  = E

mol / g 40 = E

E /   - cl m  1000 = 3AgNO V  X3 AgNO N

mol/g 40  / m  X 1000 = L 0.009    XL/mol 0.1  

g 0.000036   = - cl m 

منبع:

starters.blogfa.com

http://daneshnameh.roshd.ir/

EDTA

تئوری آزمایش:

 

 

نمک های آمونیم اسید های ضعیف هستند که یک باز قوی مستقیما تیتر نمی شوند با اضافه کردن فرمالدئید به این نمک ها عامل اسیدی تقویت شده که +H براحتی جدا می شود و با –OH از باز واکنش می دهد.

 

**چرا نمی توان این اسید را قبل از اضافه کردن فرمالدئید تیتر کرد؟

1.چون رابطه استوکیومتری مشخصی ندارند.

2.به دلیل ضعیف بودن این اسید شناساگر مناسبی ندارند.

 

فرمالدئید:

نگاه کلی

فرمالدئید ، گازی با بوی تند است. این ترکیب ساده‌ترین عضو گروه آلدئیدها بوده ، فرمول شیمیایی آن HCHO است. فرمالدئید اولین بار توسط دانشمند روسی به نام "الکساندر باتلر" در 1859 کشف شد. این گاز به‌آسانی از احتراق ناقص ترکیبات حاوی کربن ایجاد می‌شود. در دود حاصل از آتش‌سوزی جنگلها ، حجم زیادی از فرمالدئید وارد جو می‌شود. به غیر از این ، دود حاصل از اگزوز اتومبیلها و دود سیگار هم دارای مقادیری فرمالدئید هستند.

فرمالدئید بطور طبیعی در اتمسفر از واکنش اکسیژن با متان و سایر هیدروکربنها در اثر نور خورشید حاصل می‌شود. همچنین از فرآیند متابولیسم برخی از هیدروکربنها هم مقدار اندکی فرمالدئید تولید می‌شود.

 

وسایل و مواد لازم:

ارلن 250 میلی لیتری،پی پت،بورت،استوانه مدرج،فرمالدئید،معرف فنل فتالین،سود 0.1 نرمال

 

شرح آزمایش:

 

 

 

قبل از شروع آزمایش حدود 5 میلی لیتر فرمالدئید 40 % را در یک ارلن 250 میلی لیتر وارد کرده و به آن چند قطره فنل فتالن اضافه کرده و بعد با سود تیتر کنید تا رنگ صورتی کم رنگ حاصل شود به این ترتیت خنثی شدن فرمالدئید انجام می شود.

بعد در یک ارلن پی پت 5 میلی لیتر از نمونه مجهول و  با استوانه مدرج 2.5 میلی لیتر از محلول فرمالدئید خنثی شده از آزمایش قبل اضافه کرده و بعد با چند قطره فنل فتالین و سود 0.1 نرمال تیتر کنید تا رنگ صورتی کم رنگ حاصل شود.

( اگر 5 میلی لیتر از فرمالدئید خنثی شده از آزمایش اول را به آن اضافه کردید و رنگ صورتی از بین نرفت بایستی تیتراسیون را ادامه دهید و حجم سود را یادداشت کنید.)

محاسبات:

 

 

 

 

NaOH ml 1000/ NaOH L 1 X NaOH ml 5=+4NH mg ?

NaOH mol 1 / +4NH mol 1X NaOH L 1/ NaOH mol 0.1 X

X +4NH  mol 1   / +4NH g 18 X

+4NH mg  0.000009 = +4NH g 1000 / +4NH mg 1

 

 

 

 

منابع:

http://fa.wikipedia.org/

http://daneshnameh.roshd.ir/

 

starters.blogfa.com

اندازه گیری آمونیم

تئوری آزمایش:

 

 

نمک های آمونیم اسید های ضعیف هستند که یک باز قوی مستقیما تیتر نمی شوند با اضافه کردن فرمالدئید به این نمک ها عامل اسیدی تقویت شده که +H براحتی جدا می شود و با –OH از باز واکنش می دهد.

 

**چرا نمی توان این اسید را قبل از اضافه کردن فرمالدئید تیتر کرد؟

1.چون رابطه استوکیومتری مشخصی ندارند.

2.به دلیل ضعیف بودن این اسید شناساگر مناسبی ندارند.

 

فرمالدئید:

نگاه کلی

فرمالدئید ، گازی با بوی تند است. این ترکیب ساده‌ترین عضو گروه آلدئیدها بوده ، فرمول شیمیایی آن HCHO است. فرمالدئید اولین بار توسط دانشمند روسی به نام "الکساندر باتلر" در 1859 کشف شد. این گاز به‌آسانی از احتراق ناقص ترکیبات حاوی کربن ایجاد می‌شود. در دود حاصل از آتش‌سوزی جنگلها ، حجم زیادی از فرمالدئید وارد جو می‌شود. به غیر از این ، دود حاصل از اگزوز اتومبیلها و دود سیگار هم دارای مقادیری فرمالدئید هستند.

فرمالدئید بطور طبیعی در اتمسفر از واکنش اکسیژن با متان و سایر هیدروکربنها در اثر نور خورشید حاصل می‌شود. همچنین از فرآیند متابولیسم برخی از هیدروکربنها هم مقدار اندکی فرمالدئید تولید می‌شود.

 

وسایل و مواد لازم:

ارلن 250 میلی لیتری،پی پت،بورت،استوانه مدرج،فرمالدئید،معرف فنل فتالین،سود 0.1 نرمال

 

شرح آزمایش:

 

 

 

قبل از شروع آزمایش حدود 5 میلی لیتر فرمالدئید 40 % را در یک ارلن 250 میلی لیتر وارد کرده و به آن چند قطره فنل فتالن اضافه کرده و بعد با سود تیتر کنید تا رنگ صورتی کم رنگ حاصل شود به این ترتیت خنثی شدن فرمالدئید انجام می شود.

بعد در یک ارلن پی پت 5 میلی لیتر از نمونه مجهول و  با استوانه مدرج 2.5 میلی لیتر از محلول فرمالدئید خنثی شده از آزمایش قبل اضافه کرده و بعد با چند قطره فنل فتالین و سود 0.1 نرمال تیتر کنید تا رنگ صورتی کم رنگ حاصل شود.

( اگر 5 میلی لیتر از فرمالدئید خنثی شده از آزمایش اول را به آن اضافه کردید و رنگ صورتی از بین نرفت بایستی تیتراسیون را ادامه دهید و حجم سود را یادداشت کنید.)

محاسبات:

 

 

 

 

NaOH ml 1000/ NaOH L 1 X NaOH ml 5=+4NH mg ?

NaOH mol 1 / +4NH mol 1X NaOH L 1/ NaOH mol 0.1 X

X +4NH  mol 1   / +4NH g 18 X

+4NH mg  0.000009 = +4NH g 1000 / +4NH mg 1

 

 

 

 

منابع:

http://fa.wikipedia.org/

http://daneshnameh.roshd.ir/

 

starters.blogfa.com

اندازه گیری آهن(+3) و تعیین غلظت سود مجهول

آزمایش اول: اندازه گیری آهن(+3)

 

تئوری آزمایش:

 

 

نگاه کلی

این روش برای موادی که ترکیب شیمیایی آنها معین است، بکار می‌رود. در این روش ، نمونه مورد نظر را از بقیه اجزا به صورت رسوبی که ترکیب شیمیایی آن معلوم است جدا کرده ، پس از خشک و وزن کردن با ترازوی حساس ، درصد وزنی آن را حساب می‌کنیم.

شرایط تهیه یک رسوب مناسب

استوکیومتری

واکنشگر رسوب دهنده و جسم مورد نظر به نسبت وزنی معین و طبق فرمول شیمیایی با هم ترکیب می‌شوند، به عبارت دیگر واکنش آنها باید کمی باشد.

پایدار بودن

وزن رسوب در شرایط آزمایش باید ثابت بماند. مثلا نباید فرار یا قابل تجزیه بوده ، قابلیت ترکیب با اجزای موجود در هوا و یا جذب آنها را داشته باشد.

خالص بودن و خوب صاف شدن

رسوبهای کلوئیدی که به سختی صاف می‌شوند، برای وزن سنجی مناسب نیستند.

انواع رسوبها از لحاظ فیزیکی

وضع فیزیکی رسوبها به اندازه ، شکل و بار الکتریکی ذرات بستگی دارد.

رسوبهای بلوری

رسوبهای بلوری ، درشت بوده ، برای صاف کردن مناسب هستند. بنابراین بهترین رسوب برای وزن سنجی هستند. مانند

رسوبهای لخته‌ای

رسوبهای لخته‌ای مانند رسوب که شبیه شیر منعقد شده بوده ، ذرات ریز بهم چسبیده و ذرات درشتتری ایجاد می‌کنند و در اثر شستشو با آب (عمل والختی) ، دوباره به ذرات ریز تبدیل می‌شوند.

رسوبهای ژلاتینی

مانند فریک هیدروکسید هستند. قطر ذرات این رسوبها خیلی کوچک است، بنابراین از صافی رد می‌شوند و بعضی از آنها نیز سوراخهای صافی را مسدود کرده ، باعث کندی عمل صاف کردن می‌شوند.

فرایند تشکیل رسوب

تشکیل رسوب ، هم یک پدیده شیمیایی و هم یک پدیده فیزیکی است. پدیده شیمیایی تشکیل رسوب شامل واکنش شیمیایی واکنشگر و نمونه مورد نظر است. پدیده فیزیکی ، شامل هسته‌زایی و رشد بلور (دو مرحله) است.

هسته‌زایی

تشکیل اولیه ذرات کوچک فاز جامد در فاز مایع را که از رسوب مورد نظر به حالت اشباع رسیده باشد، هسته‌زایی می‌نامند.

 

 

رشد بلور

رسوب کردن یونهای محلول روی ذرات اولیه را که سبب درشت شدن رسوبها می‌شود، رشد بلور می‌نامند.

ناخالصیهای موجود در رسوب

ناخالصیهای همرسوبی و انواع آن

همراهی مواد ناخالص محلول با رسوب تشکیل شده را همرسوبی می‌نامند و انواع آن عبارتند از:

·         جذب سطحی :
در این حالت ، ناخالصی فقط در سطح رسوب جذب می‌شود. مانند جذب سطحی یونهای نقره توسط رسوب کلرید نقره. رسوبهای کلوئیدی به دلیل جاذبه الکتریکی بارهای مخالف ، بیشتر خاصیت جذب سطحی دارند.

·         احتباس :
در این حالت ، ناخالصیها در داخل رسوب هستند، یعنی فاز رسوب در حین تشکیل ، مقداری از مواد ناخالص یا محلول اولیه را در بین ملکولهای خود به دام می‌اندازد. حتی با شستشو هم نمی‌توان آنها را از هم جدا کرد.

·         در برگیری :
در این روش ، ناخالصیهایی که سیستم و ساختمان بلوری آنها با رسوب یکی است، همراه با ذرات رسوب ، متبلور می‌شوند.

ناخالصیهای پس رسوب

در این حالت ، پس از تشکیل رسوب ، ترکیب دیگری که در شرایط آزمایش کم محلول است، رسوب کرده ، لایه‌ای از ناخالصیها روی رسوب اولیه را می‌پوشاند. به عنوان مثال در جدا کردن کلسیم از منیزیم توسط رسوب دادن با یون اکسالات ، رسوب کلسیم اکسالات به آرامی تشکیل می‌شود. اگر محلول ، مدتی بیش از اندازه لازم بماند، مقدار کمی منیزیم اکسالات روی کلسیم اکسالات رسوب می‌کند.

 

 

 

 

حلالیت و حاصلضرب حلالیت یک رسوب

حلالیت رسوبها کم بوده ، رفتار آنها در آب مانند الکترولیتها است، یعنی وقتی رسوب AB که دارای یک یون فلزی و یک آنیون یک ظرفیتی است، در آب تشکیل می‌شود. محلول از یونهای A و B اشباع می‌شود. مقدار رسوب حل شده را برحسب واحد مول در لیتر بیان می‌کنند و حاصلضرب غلظتهای A و B را حاصلضرب حلالیت رسوب() می‌نامند.

صحت روش وزن سنجی ، به حلالیت رسوب تشکیل شده بستگی دارد.

عوامل موثر بر حلالیت

·         اثر یون مشترک :
افزایش یک الکترولیت که دارای یک یون مشترک با رسوب است، سبب کم شدن حلالیت می شود.

·         اثر PH محیط :
اگر به رسوبی که نمک یک اسید ضعیف است، یک اسید قویتر اضافه کنیم، مقداری از رسوب حل می‌شود. تشکیل هر رسوب باید در PH مناسب آن صورت گیرد. با کنترل PH یک محلول که شامل چند کاتیون است، می‌توان آنها را به صورت رسوب هیدروکسید جدا کرد.

·         اثر حلال :
مواد قطبی در حلالهای قطبی بیشتر حل می‌شوند و مواد غیر قطبی در حلالهای غیر قطبی. برای رسوب دادن اغلب یونها ، می‌توان با افزودن یک حلال آلی امتزاج پذیر با آب ، حلالیت آنها را کاهش داده ، به صورت رسوب ، آنها را جدا کرد.

·         بجز این عوامل که توضیح داده شد عواملی مثل الکترولیتها ، عوامل کمپلکس کننده ، هیدرولیز ، دما ، فشار و اندازه ذرات در حلالیت رسوبها تأثیر دارند.

مراحل وزن سنجی

1.      _تشکیل رسوب

2.      _صاف کردن

3.      _شستشو

4.      _خشک کردن در دمای مناسب

5.      _سرد کردن تا دمای محیط

6.      _توزین و محاسبه

وسایل و مواد لازم: بشر 400 میلی لیتر،همزن،قیف،بوته چینی،گیره،کوره،کاغذ صافی بدون خاکستر،سه پایه،اسید نیتریک غلیظ،محلول آمونیاک 4 مولار،محلول آمونیم نیترات 1 %

 

شرح آزمایش:

 

40 میلی لیتر از نمونه را برداشته و در بشری می ریزیم و سپس 2 میلی لیتر اسید نیتریک را به آن اضافه می کنیم(نمونه موجود در آزمایشگاه اسید نیتریک به آن اضافه شده است و ریختن اسید نیتریک لازم نمی باشد). چند قطره آمونیاک به آن اضافه می کنیم ریختن آمونیاک را زمانی متوقف می کنیم که از نمونه ما یا بوی آمونیاک استشمام شود یا کاغذ تورنسل موجود آبی شود.50 میلی لیتر آب مقطر را در بشری دیگر ریخته و حرارت می دهیم تا داغ شود(مواظب باشیم به جوش نیاید).وقتی که داغ شد نمونه را در بشر داغ شده ریخته و صبر می کنیم تا نمونه کاملا ته نشین شود(رسوب پیدا کند).وقتی که کاملا ته نشین ش2د کاغذ صافی که3 قبلا آن را وزن کرده ایم در سر ارلنی می گذاریم و محلول را در آن می ریزیم تا آب موجود در آن تخلیه شود و فقط رسوب آن باقی بماند.رسوب باقی مانده را توسط محلول داغ آمونیوم نیترات  1 % شتشو می دهیم.رسوب موجود در کاغذ صافی را دو سه روز می گذاریم تا کاملا خشک شود بعد آن را اندازه گیری کرده و از وزن کاغذ صافی کم می کنیم تا وزن رسوب بدست آید.

 

 

نکاتی در خور توجه:

*علت اضافه کردن اسید نیتریک:

نمونه ما حاوی آهن + 2 و + 3 می باشد در حالی که ما فقط آهن + 3 مثبت لازم داریم به همین خاطر اسید نیتریک را اضافه کرده تا همه آهن های + 2 را به + 3 تبدیل کند.

*علت اضافه کردن آمونیاک به صورت قطره قطره:

اگر به یکباره آمونیاک را در نمونه بریزیم مقدار Q افزایش می یابد و این نامطلوب می باشد برای جلوگیری باید تا جای ممکن مقدار افزوده شده کم و آهسته اضافه شود تا غلظت به آرامی افزایش یابد و اندازه رسوب درشت شود.

*علت ریختن آب مقطر:

باعث می شود مقدار Q کاهش یابد و این تغییر باعث کم شدن فوق اشباع نسبی و در نتیجه تشکیل رسوب بلوری می شود.

*علت ریختن آب مقطر داغ:

چون ثابت حاصلضرب انحلال اغلب با افزایش دما،افزایش می یابد در نتیجه حلالیت افزایش و مقدار فوق اشباع کاهش می یابد و رسوب بلوری می شود.

*علت شستشوی رسوب توسط محلول داغ آمونیوم نیترات:

کلر یک آنیون مزاحم در این آزمایش می باشد و برای حذف کردن آن از محلول داغ آمونیوم نیترات استفاده می کنیم.

 

 

محاسبات:

g 0.74 = وزن کاغذ صافی

g 1.37 = وزن رسوب

وزن کاغذ صافی _ وزن رسوب = وزن نمونه

3O2Fe g 0.63  = g 0.74 _ g 1.37 = وزن نمونه

                                  3O2Fe g 160/ 3O2Fe mol 1 X 3O2Fe g 0.63  = Fe g ?

Fe g 0.44 = Fe mol 1 / Fe g 56X 3O2Fe mol 1 / Fe mol 2 X

Fe g 69.84 = 100X g 0.63/ g0.44= درصد آهن موجود در نمونه

 

آزمایش دوم: تعیین غلظت سود مجهول

 

تئوری آزمایش:

 

 

در روش تیتر کردن سلولی با غلظت مشخصی به محلول دیگر اضافه می‌شود تا واکنش شیمیایی بین دو ماده حل شده کامل گردد. محلولی که غلظت آن مشخص باشد، محلول استاندارد است. در عمل تیتر کردن ، محلول استاندارد را از یک بورت به محلولی که باید غلظت آن اندازه گرفته شود، می‌افزایند و این عمل تا وقتی ادامه دارد که واکنش بین محلول استاندار تیتر شونده کامل شود. پس با استفاده از حجم و غلظت محلول استاندارد و حجم محلول تیتر شونده ، غلظت محلول تیتر شونده را حساب می‌کنند.

 

وسایل و مواد لازم: ارلن 250 میلی لیتری،پی پت،بورت،اسید کلریدریک استاندارد شده،شناساگر فنل فتالین

شرح آزمایش:

 

5 میلی لیتر سود با غلظت مجهول(تیتر شونده) را داخل ارلنی میریزیم و 10 میلی لیتر آب مقطر و 3 قطره معرف فنل فتالین به آن اضافه می کنیم تا محلول صورتی رنگ شود.سپس اسید کلریدریک 0.1 مولار(تیترانت) را در بورت میریزیم. ارلن را زیر بورت قرار داده ، با دست چپ بشر بورت را باز می‌کنیم تا قطره قطره محلول اسید به محلول سود اضافه شود و با دست راست ، ارلن را به‌آهستگی حرکت دورانی می‌دهیم. طی این عمل ، محلول داخل ارلن ، بی رنگ  می‌شود و این نشانگر اسیدی شدن محلول داخل ارلن است. افزایش اسید را متوقف کرده و حجم اسید کلریدریک مصرفی را از روی بورت می‌خوانیم.

نکاتی در خور توجه:

*در نوک بورت نباید حباب هوا وجود داشته باشد. در صورت وجود داشتن هوا در نوک بورت باید شیر بورت را کمی باز کرد تا نوک بورت از مایع پر شود.

*در موقع خواندن بورت ، چشم باید در امتداد سطح مایع بوده و عدد مقابل خط زیر سطح مقعر مایع خوانده شود.

محاسبات:

                                                                                 سود                             اسید

2V2M          =           1V1M

 

ml 4.7= نقطه پایانیV      M 0.09 = 2M <-----    ml 5X  2M     =    ml 4.7X M 0.1

خطای تیتراسیون را به علت نداشتن حجم نقطه اکی والان نمی توانیم بدست بیاوریم.نقطه اکی والان یک نقطه نظری می باشد.

منبع: shimi.blogfa.com

 starters.blogfa.com

تعیین مولاریته اسید در نمونه های ناهمگن روغن و اسید قسمت 2

انواع شناساگرها

دو نوع شناساگر داخلی و خارجی را معرفی می‌کنیم:

شناساگر داخلی

اگر به محلول تیتر شونده ، چند قطره از یک شناساگر افزوده شود و پس از پایان عمل تغییر رنگ در محلول ایجاد شود، چنین شناساگری را شناساگر داخلی یا درونی نامند.

شناساگر خارجی

در برخی حالات قبل از آن که نقطه پایان به ظهور برسد، بین شناساگر و محلول تیتر شونده یک واکنش صورت می‌گیرد و در این حالت نقطه پایان بسیار سریع پدیدار می‌شود، مثل تیتر کردن فسفات با استات اورانیل در حضور شناساگر فروسیانور پتاسیم ، فروسیانور پتاسیم با یونهای اورانیل قبل از رسیدن به نقطه پایان واکنش می‌دهد.

برای بدست آوردن نتیجه صحیح و خوب باید به دفعات لازم چند قطره از محلول بالای رسوب ( یا محلولی که پس از صاف کردن رسوب بدست می‌آید ) را در فاصله زمانهای مساوی ، روی یک قطعه کاغذ صافی با شناساگر سیانور پتاسیم آزمایش کرد. چنین شناساگری ، شناساگر خارجی نامیده می‌شود.

 

 

 

 

فاصله تغییر PH و تغییر رنگ برخی از شناساگرهای مهم اسید و باز که متداولند و جدول زیر آمده است:

نام متداول	فاصله PH برای تغییر رنگ	رنگ اسید	رنگ باز	نوع شناساگر
لیتموس (تورنسل)	8- 5/5	قرمز	آبی
آبی متیل	3/2- 2/1	قرمز	زرد
بنفش متیل	2- 0	زرد	بنفش
آبی تیمول	6/9-8	زرد	آبی	اسیدی
زرد متیل	4-9/2	قرمز	زرد	بازی
نارنجی متیل	4/4-1/3	قرمز	زرد	بازی
سبزبرموکرزول	4/5- 8 /3	زرد	آبی	اسیدی
قرمز متیل	3/6-2/4	قرمز	زرد	بازی
قرمز کلروفنول	4/6-8/4	زرد	قرمز	اسیدی
آبی برموتیمول	6/7-0/ 6	زرد	آبی	اسیدی
قرمزفنول	8-4/6	زرد	قرمز	اسیدی
قرمز خنثی	8-8/6	قرمز	زرد- نارنجی	بازی
ارغوانی کرزول	9-4/7	زرد	ارغوانی	اسیدی
فنل فتالئین	6/9-8	بی‌رنگ	قرمز	اسیدی
تیمول فتالئین	5/10-3/9	بی‌رنگ	آبی	اسیدی
زرد آلیزارین	12-1/10	زرد	قرمز	بازی

 

 

 

 

 

 

 

* سوال :

چرا فنل فتالین در عمل تیتراسیون استفاده می شود؟

در عمل تیتراسیون برای اینکه دقیقا تشخیص بدهیم کدام لحظه ، لحظه ی خنثی شدن است با اضافه کردن فنل فتالین رنگ محلول را تغییر میدهیم و وقتی به آن سود 0.1 نرمال اضافه میکنیم در اولین لحظه ای که رنگ محلول تغییر پیدا کرد(صورتی) تیتراسیون را متوقف میکنیم . این لحظه همان نقطه ی هم ارزی را به ما نشان میدهد . این کار به این منظور انجام میشود که بتوانیم نقطه ی هم ارزی را به طور دقیق تری اندازه بگیریم.

 

* سوال :

چرا در عمل تیتراسیون آب  اضافه می کنیم ؟

آب ، حلال معمول برای تیتراسیون خنثی‌شدن است، زیرا بسادگی در دسترس و ارزان و غیرسمی است. پایین بودن ضریب انبساط دمایی آن یک خاصیت اضافی دیگر است.
ولی بعضی از آنالیتها در محیط آبی قابل تیتر کردن نیستند، زیرا انحلال‌پذیری آنها بسیار پایین است، یا چون قدرتهای اسیدی یا بازی آن چندان زیاد نیست که نقاط پایان رضایت بخشی را فراهم کنند. غلظت چنین موادی را اغلب می‌توان با تیتر کردن آنها در حلال دیگر به غیر از آب تعیین کرد.

محاسبات:

معمولا مولاریته ماده ها را در اختیار ما میگذارند ، اما فرمولی که ما طی آن جواب را به دست می آوریم بر حسب نرمالیته بیان شده به همین دلیل ما برای به دست آوردن نرمالیته از مولاریته ی داده شده ملزم به استفاده از رابطه ی  α M N =  هستیم که در این رابطه M مولاریته ی معلوم شده ی ماست و α ظرفیت ماده است که در اسید های هیدروژن دار برابر تعداد هیدروژن های اسیدی میباشد. با استفاده از این رابطه نرمالیته ی ماده به راحتی بدست می آید.

چون HCl یک اسید تک ظرفیتی میباشد نتیجه میگیریم نرمالیته ی آن برابر مولاریته ی آن یعنی 1/0 است .

در آزمایش اول 6.3 میلی لیتر از سود 0.1 نرمال استفاده کرده تا محلول ما پایدار و صورتی رنگ شود در آزمایش دوم 6.5 میلی لیتر و در آزمایش سوم این رقم 7.4 میلی لیتر می باشد.

مولاریته اسید:

آزمایش 1)

   NaOH L 1 /  NaOH mol1 1 L / 1000 ml X  X NaOH lm 6.3 = HCl mol ?

_{HCL mol 0.0063 =} NaOH mol 1 /  HCL mol1  X

                        _{L/mol0.21 = L 0.03  /mol 0.0063} = حجم محلول / تعداد مول  =مولاریته

آزمایش 2)

_{HCL mol 0.0065 =}   mol HCL ?

                        _{L/mol0.21 = L 0.03  /mol 0.0065} = حجم محلول / تعداد مول  =مولاریته

آزمایش 3)

_{HCL mol 0.0074 =}   mol HCL ?

                        _{L/mol0.24 = L 0.03  /mol 0.0074} = حجم محلول / تعداد مول  =مولاریته

میانه:

با مرتب کردن اعداد بدست آمده از آزمایشات میانه ما عدد وسط یعنی 6.5 میلی لیتر           می باشد.

 

میانگین:

 6.7 = میانگین

 

 

 

انحراف از میانگین:

 

میانگین - داده های هر مرحله = انحراف از میانگین

1)                 0.4

2)                 0.2

3)                 0.7

 

انحراف استاندارد:

0.41 = انحراف استاندارد

 

 

اندازه گیری حد اطمینان 90 % :

 

 

  n√/Ts ± میانگین=CL

 

3√/2.35 ± 6.7=CL

 

5.4= اندازه گیری حد اطمینان 90 %

 

 

نتیجه و علل خطا:

جواب های ما در این سه آزمایش تنها L / mol 0.03 با هم تفاوت دارند که این تفاوت از هم و از مقدار واقعی به خاطر این به وجود آمده که ما تیتراسیون را وقتی پایان دادیم که از نقطه ی هم ارزی گذشته بود به همین دلیل NaOH بیشتر از حد مورد نظر در محلول حل شد که این خطا از بی تجربگی آزمایشگرها بوجود می آید .

 

 

 

منبع :

starters.blogfa.com

shimi.blogfa.com

تعیین مولاریته اسید در نمونه های ناهمگن روغن و اسید ..قسمت 1

تئوری آزمایش:

 

 

تیتر کردن از روش‌های تجزیه حجمی است. در تجزیه حجمی ابتدا جسم را حل کرده و حجم معینی از محلول آن را با محلول دیگری که غلظت آن مشخص است که همان محلول استاندارد نامیده می‌شود، می‌سنجند. در تیتراسیون محلول استاندارد به‌طور آهسته از یک بورت به محلول حاوی حجم مشخص یا وزن مشخص از ماده حل شده اضافه می‌شود

افزایش محلول استاندارد ، آنقدر ادامه می‌یابد تا مقدار آن از نظر اکی‌والان برابر مقدار جسم حل شده شود. نقطه اکی‌والان نقطه ای است که در آن ، مقدار محلول استاندارد افزوده شده از نظر شیمیایی برابر با مقدار حجم مورد نظر در محلول مجهول است. این نقطه را نقطه پایان عمل از نظر تئوری یا نقطه هم ارزی نیز می‌گویند.
روش تیتر کردن
در عمل تیتر کردن ، محلول استاندارد را از یک بورت به محلولی که باید غلظت آن اندازه گرفته می‌شود، می‌افزایند و این عمل تا وقتی ادامه دارد تا واکنش شیمیایی بین محلول استاندارد و تیتر شونده کامل شود. سپس با استفاده از حجم و غلظت محلول استاندارد و حجم محلول تیتر شونده ، غلظت محلول تیتر شونده را حساب می‌کنند.

 

 

انواع تیتر کردن عبارت اند از:

_واکنش‌های خنثی شدن یا واکنش‌های اسید و باز 

_واکنش‌های رسوبی

_واکنش‌هایی که تولید ترکیبات کمپلکس می‌کنند.

     _ روشهایی که بر اساس انتقال الکترون هستند؛ مانند واکنش‌های اکسایش و کاهش

وسایل و مواد لازم: ارلن 250 میلی لیتری،استوانه مدرج،پی پت،بورت،قطره چکان،سود 0.1 نرمال،فنل فتالین

 

شرح آزمایش:

 

 

15 میلی لیتر روغن ،30 میلی لیتر هیدروکلریک اسید درون یک قیف جدا کننده بهم می زنیم تا روغن داخل محلول به صورت معلق در آید.5 میلی لیتر از ان را بلافاصله با استوانه مدرج بر میداریم و داخل یک ارلن 250 میلی لیتری وارد می کنیم و با استوانه مدرج 7.5 میلی لیتر آب مقطر و چند قطره شناساگر فنل فتالین به آن اضافه می کنیم و آن را به وسیله سود 0.1 نرمال تیتر می کنیم.این آزمایش را سه بار تکرار می کنیم.

 

 

 

 

شناساگرها:

مقدمه

برای تعیین نقطه پایان در حین تیتر کردن از ترکیبات شیمیایی مشخص استفاده می‌شود که در نزدیکی نقطه تعادل در اثر تغییر غلظت مواد تیترشونده شروع به تغییر رنگ می‌کنند. این ترکیبات ، مواد رنگی شناساگر می‌باشند. به عبارتی دیگر ، شناساگرها ماده ای رنگی هستند که رنگ آنها در محیط اسیدی و قلیایی با هم تفاوت دارد.

کاربرد شناساگرها

یکی از ساده ترین راه تخمین کمی PH ، استفاده از یک شناساگر است. با افزودن مقدار کمی از یک شناساگر به یک محلول ، تشخیص اسیدی یا بازی بودن آن ممکن می‌شود. در صورت مشخص بودن PH ، تغییر شناساگر از یک شکل به شکل دیگر ، با توجه به رنگ مشاهده شده ، می‌توان تعیین کرد که PH محلول کم‌تر یا بیشتر از این مقدار است. شیمیدان‌ها از این گونه مواد برای شناسایی اسیدها و بازها کمک می‌گیرند.

شناساگرهای زیادی وجود دارد که معروفترین آنها لیتموس (تورنسل) است که در محیط اسیدی ، قرمز ، در محیط بازی ، آبی و در حدود خنثی بنفش رنگ است. تغییر رنگ آن در نزدیکی PH برابر 7 رخ می‌دهد. در هر حال تغییر رنگ ناگهانی نیست. فنل فتالئین ، معرف دیگری است که بیشتر برای بازها قابل استفاده است. این ماده جامدی سفید رنگ است که در آزمایشگاه محلول الکلی آن را بکار می‌برند. این محلول در محیط اسیدی رنگ و در محیط قلیایی رقیق ارغوانی است.

می‌توان از آب کلم سرخ نیز به‌عنوان یک شناساگر اسید و باز استفاده کرد. از آمیختن شناساگرهای مختلف با یکدیگر نوار کاغذی بدست می‌آید که با یک مقیاس رنگ مقایسه‌ای همراه است و برای اندازه گیری‌های تقریبی PH بطور گسترده کاربرد دارد.

.

انواع تقلب در فرآورده های گوشتی

انواع سوسیس و کالباس، همبرگر از فرآورده‌های گوشتی رایج در کشور هستند، شاید صنایع گوشت بیشترین امکان تقلب را در بین گروههای مختلف مواد غذایی داشته باشند...

ادامه مطلب

مایکو توکسین

starters.blogfa.com

قارچها موجودات هتروتروف هستند و با جذب مواد مغذی محلول تغذیه می کنند و با وجود اینکه برخی از قارچها میتوانند مواد نامحلول پیچیده نظیر لیگنوسلولز را متابولیزه کنند اما این مواد باید با ترشح آنزیمهای مناسب خارج سلولی مورد تجزیه قرار گیرند. ....

ادامه مطلب

آشنایی بیشتر با صنعت بسته بندی صنایع غذایی

بسته بندی عبارت است از هنر وعلم اماده سازی مواد غذایی برای انبار کردن ،ودر نها یت فروش . بسته بندی باید تا حد امکان ساده و ارزا ن باشد ضمن اینکه اهداف اولیه بسته بندی یعنی خاصیت حفاظتی و جذابیت رانیز دارا باشد .

ادامه مطلب