مقدمه:

1) در مورد سالمونلا:

  سالمونلا باکتري گرم منفي است که در جوجه‌ها و تخم‌مرغها معمولاً وجود دارد. سالمونلا عامل يکي از شايعترين مسموميتهاي غذايي مي‌باشد. سالمونلا مي‌‌تواند تخمدانهاي پرنده را آلوده کند و قبل از تخم گذاردن پرنده، وارد تخم مرغ شود يا اينکه بهنگام تخم گذاردن پرنده به پيوسته تخم مرغ نفوذ کند. سالمونلا با پختن غذا از بين مي‌رود ولي غذاهايي که حاوي تخم مرغ خام هستند (مانند سس مايونز) مشکل‌ساز خواهند بود.

اين بيماري از طريق تماس با پوست برخي از دوزيستان مثل لاک‌پشت نيز قابل انتقال است.

سالمونلا در تخم مرغ :

سالمونلوسيس كه عامل آن اس.پولوروم ( s . Pullorum) است ، بيماري شناخته شده ماكيان است. اكنون سالهاست كه اين بيماري تقريباً در همه كشور ها تحت كنترل است و اين ميكروب بنظر مي رسد مسئله اي عليه عموم بوده باشد . اما عفونت هاي ساب كلينيكي ( sub- clinic ) ماكيان توسط گونه هاي ديگر سالمونلا همچنين وجود ناقلين بين آنها به خصوص مرغها ، يكي از عوامل اصلي سرايت ميكروب در مسموميت غذايي انسان در سطح جهان است . تخم مرغ بطور طبيعي طوري ساخته شده است كه حفاظ مؤثري ( پوسته ) در برابر ورود هر چه زيانبار از جمله ميكروبها داراست و بنابراين داخل تخم مرغ هنگام تولد ان بطور طبيعي استريل است و باكتري ها از قبيل سالمونلا در روده و حفره ابتداي روده ( cecum ) وجود دارند . قسمت پوسته هنگام تولد تخم آلوده شده و آلودگي ميكروبي در تمام مراحل تا آنگاه كه جوجه پوسته را مي شكند ، وجود دارد . جوجه با نوك زدن به پوسته تخم بدنيا مي آيد و سيستم تغذيه اي جوجه به اين وسيله از پوسته آلوده با سالمونلا آلوده ميشود . تغييرات تدريجي در تيپ هاي ( serotype ) سالمونلا در دسته ماكيان در هر زمان وجود دارد . اين طور كه سروتيپ موجود به آرامي از بين مي رود و از غذاي آلوده يا منابع ديگر ، ميكروب جديد جانشين آن ميشود . اين جانشيني ميكروبي عموماً به انسان رسيده باعث آلودگي غذايي و مسموميت مي گردد . بين سال هاي 1987 و 1990 آلودگي گسترده از سالمونلا اينتريتيديس ( Enteritidis ) در آمريكا و انگليس و جاهاي ديگر وجود داشت . پيدا شدن يك تخم مرغ كه از داخل توسط اين ميكروب آلوده بود ، زنگ خطر را بصدا درآورد و موجب نگراني توليدكنندگان تخم مرغ گرديد . بعد از آن هنوز اين اتفاق تكرار نشده است اما بدگماني عمومي بمدت زيادي وجود خواهد داشت .

2) در مورد محیط های کشت مورد استفاده در این آزمایش:

الف) محيط سالمونلا ـ شيگلا (s.s) :

در محيط S.s تركيباتي مانند پپتون ، لاكتوز ، املاح صفراوي ، نوترال رد، آگار، بريلين گرين ، تيو سولفات سديم وجود دارد . اين محيط فقط اجازه رشد به باكتري هاي سالمونلا و شيگلا را مي دهد . بريلين گرين موجود در محيط مانع رشد باكتريهاي گرم ـ مثبت و ديگر گرم منفي ها در محيط S.s مي شود . با استفاده از اين محيط مي‌توان سوشهاي تخمير كننده لاكتوز را از سوشهايي كه توانايي تخمير لاكتوز را ندارند، تشخيص داد .

سالمونلا ، شيگلا قادر به تخمير لاكتوز نبوده، درمحيط S.s كلني هاي بي رنگ ايجاد مي كنند كه ارزش تشخيصي دارد .

طرز تهيه :

براي ساخت اين محيط مقدار مورد نياز پودر S.s را در آب مقطر ريخته و به حجم مي رسانيد آنگاه بوسيله جوشاندن پودر را در آب مقطر كاملاً حل مي‌كنيد . اين محيط احتياج به اتوكلاو ندارد .

ب) محیط کشت اسلنت تریپل شوگر آیرون آگار(Triple Sugar Iron agar slant (TSI slant:

:Control organisms
E.COLI: A/A(G)

Shigella felexneri: K/A

Proteus vugaris: K/A,H2S

 Pseudomonas aeruginosa: K/N

Ancubate: Aerobic 35° C, 24  hrs
shelf life: 8 week

Price(baht): (5 return tube)

محیط 3 قندی است که به صورت مارپیچ کشت می دهیم.بسته به زرد شدن سطح یا عمق یا کل لوله قند مصرفی را شناسایی کنیم.گلوگز+(بالای محیط) ،  فروکتوز+(پایین محیط) ، ساکارز+(کل محیط)

ج) :Simmon citrate

باکتری در اثر مصرف سیترات محیط سبز زنگ را به آبی رنگ تبدیل می کند.

تئوری آزمایش:

سالمونلا باکتری هایی میله ای،گرم منفی،دارای فلاژله ازز نوع مژک،اسپور تولید نمیکنند،گلوکز مصرف می کنند،مصرف کننده لاکتوز و ساکارز نیستند،منشا روده ای دارند و به عنوان باکتری های مدفوعی شناخته می شود.از تخم مرغ،گوشت های قرمز کشتار شده به روش های غیر بهداشتی جدا شده اند.

می توانند در انسان اگر به تعداد کافی وارد بدن شوند از طریق دما مسمومیت ایجاد کنند.قبلا با توجه به مسمومیتی که در موجود هدف بوجود می آوردند دسته بندی می شدند اما امروزه بر مبنای سه آنتی زن سطحی یا سوماتیک(o) ، آنتی ژن فلاژله ای(H) و آنتی ژن کپسولی(Vi) دسته بندی می شوند.هر دسته یه زیر گروه هایی تقسیم می شود که از لحاظ سرولوژیکی با همدیگر تفوت دارند که این گروه ها را سرووار یا سروتیپ می گویند و هکرام از سرووار ها نیز با هم تفات دارند که بیووار یا بیوتیپ گفته می شوند.

در ارتباط با مسمومیت شاخصی تحت عنوان پاتوژنیسه(شاخص بیماری زایی) معرفی می شود که عبارت است از نسبت تعداد افراد با علایم بیماری به تعداد کل افراد مجاور شده با عامل بیماری.

این قدرت بیماری زایی در به وجود امدن علایم بیماری نقش مهمی دارد.هر چه باکتری قدرت بیماری زایی بالاتری داشته باشد تعدادی که توانایی ایجاد بیماری در فرد را دارد کم است و هرچه قدرت بیماری زایی کمتر باشد بایستی تعداد بیشتری میکروارگانیسم وارد بدن شوند تا بتوانند ایجاد مسمومیت کنند.مسمومیت با ایجاد درد در ناحیه شکم به شکل تهوع،استفراغ و در مراحل شدید تر اسهال بروز می کند.طول دوره بیماری 2 تا 8 روز می باشد که می تواند طولانی تر هم باشد.

درمان بوسیله ی آنتی بیوتیکی به نام کلرآمفنیکول است که به صورت کپسول خوراکی مورد استفاده قرار می گیرد.بیمار کسل،بی حال،با تب هایی که با فاصله ی زمانی تکرار می شوند موجه می شود.

شرح آزمایش:

محیطی که ما از آن به عنوان نمونه حاوی باکتری استفاده می کنیم آبگوشت می باشد.

محیط های کشت ما شامل S.S agar ، TSI ، Simmon citrate می باشد که در ابتدا توضیحاتی مختصر در مورد هر کدام داده شد.

مقداری از آبگوشت را توسط لوپ سوزنی استریل شده برداشته و آن را به صورت زیگزاگ در محیط های simmon citrate و  TSI agar کشت می دهیم و آن ها را در انکوبه 24 تا 48 ساعت می گذاریم.

همچنین مقداری دیگر نیز از آبگوشت را توسط لوپ استریل شده برداشته و به صورت زیگزاگی در پلیت              

s.s agar کشت می دهیم و آن را در انکوبه به مدت می گذاریم.

نتیجه آزمایش:

در محیط سیمون سیترات در اثر رشد باکتری محیط آبی رنگ شده است که نشان دهنده مصرف سیترات توسط این باکتری می باشد.(citrate +)

محیط s.s agar ما تولید کلونی های بی رنگ کرده است که نشان می دهد باکتری ما سالمونلا نمی باشد.

سالمونلا در این محیط تولید کلونی های بی رنگ با مرکز سیاه رنگ می کند.

محیط TSI agar ما تغییری در آن ایجاد نشده است که نشان می دهد باکتری ما سالمونلا نمی باشد.

در صورت تغییر این محیط زرد رنگ(زرد و قرمز و سیاه) می شود.

برای تشخیص باکتری مجهول باید رنگ امیزی شود که در این هفته آزمایش مذکور انجام می شود.

starters.blogfa.com

 http://microbes.blogfa.com & http://www.daneshju