روش كار :
اگر نمونه مثل پسته با پوست باشد 100 گرم و در مورد بقيه نمونه ها 50 گرم از نمونه
را وزن مي كنيم . براي راحت تر باز شدن بافت نمونه 5 گرم نمك به آن اضافه مي كنيم
. سپس 200 ميلي ليتر متانول 80 درصد به نمونه اضافه مي كنيم .
اگر نمونه
ها چرب باشند مثل سويا ، بادام ، پسته و پفك بايد 100 ميلي ليتر هگزان هم به آن
اضافه كنيم . ولي گندم برنج و آرد ذرت نيازي به هگزان ندارند . محتويات را 30
دقيقه مخلوط ميكنيم .
آنهايي كه
هگزان دارند بعد از هم زدن براي جدا كردن بهتر چربي سانتريفوز مي كنيم . (5 دقيقه
بادور2000) بعد با دكانتور هگزان را جدا مي كنيم . و محلول حاصل را صاف مي كنيم .
از محلول صاف شده 20 ميلي ليتر بر مي داريم ، با 130 ميلي ليتر اب مقطر مخلوط كرده
و با كاغذ صافيهاي مخصوص GFF كه منافذ ريزتري دارند دوباره صاف مي كنيم .
75 ميلي
ليتر از محلول مرحله دوم صاف كردن را بر مي داريم و در ستون IAC مي
ريزيم . اين ستون از طريق پيوند آنتي بادي ، آفلاتوكسين را از محلول جدا مي كند .
در واقع وظيفه اين ستون خالص سازي است .
بايد بافر
فسفات هيدروژن دي سديم بريزيم تا ستون فعال شود . پس از عبور كامل بافر ستون آماده
مصرف است ولي هيچگاه نبايد ستون كاملاً خشك شود .
پس از عبور
كامل نمونه از ستون ، ستون را با آب مي شوييم و بعد با 5/1 ميلي ليتر متانول ستون
را مي شوييم . متانول آفلاتوكسين را از ستون جدا كرده و در ظروفي به نام ويال جمع
آوري مي كند . يك مرحله 
متانول
مي ريزيم بعد از 1 دقيقه توقف نيم سي سي متانول مي ريزيم . ويال را در دماي 
توسط
بخاز ازت خشك مي كنيم .
150ميكروليتر
از محلولي حاوي هگزان و استون و متانول را توسط ميكروپيپت در ويال ميريزيم . بعد
از مخلوط كردن ، 100 ميكروليتر از محلول را توسط سرنگ ها ميلتون برداشته روي صفحات
كروماتوگرافي تزريق مي كنيم .
صفحات را
در تانك حاوي ترشيو بوتيل متيل اتر متانول + آب قرار مي دهيم . در تانك حتماً بايد
بسته باشد و در محيط تاريك قرار گيرد چون افلاتوكسين به نور حساس است .
سپس صفحات
توسط نور ماوراء بنفش بررسي مي شود . نقاط به صورت نوراني ديده ميشود و توسط
دستگاه اسكن شده و پس از پردازش اطلاعات حاصل از اسكن توسط نرم افزار مربوط در
كامپيوتر و مقايسه آن با نمونه هاي استاندارد غلظتهاي سم تعيين مي شود .
800x600
برچسبها:
تشخيص| آفلاتوكسين |كروماتوگرافي|لايه |نازك|,
TLC
+ نوشته شده توسط نارگل در جمعه سی و یکم شهریور ۱۳۹۱ و ساعت
|